[发明专利]一种建立基于微RNA干扰的肝纤维化动物受精卵的方法在审
| 申请号： | 201510116826.9 | 申请日： | 2015-03-17 |
| 公开（公告）号： | CN104762319A | 公开（公告）日： | 2015-07-08 |
| 发明（设计）人： | 高旭;刘彦虹;张艳芬;马宁;董敏;乔瑜;王曦迪;徐亚;娄阁 | 申请（专利权）人： | 哈尔滨医科大学 |
| 主分类号： | C12N15/85 | 分类号： | C12N15/85;C12N15/113;C12N5/10 |
| 代理公司： | 北京科龙寰宇知识产权代理有限责任公司 11139 | 代理人： | 孙皓晨 |
| 地址： | 150086 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种建立基于微RNA干扰的肝纤维化动物受精卵的方法，属于生物技术领域。本发明首先构建了CAGG-Sponges-miR-483质粒，然后建立了miR-483稳定干扰的转基因小鼠的受精卵。本发明建立了一种基于微RNA稳定干扰的遗传改变小鼠模型，该模型是基于外源核酸序列整合入小鼠基因组实现的，能够作为肝纤维化机制研究的体内模型加以利用，为微RNA在肝纤维化中作用的在体功能研究提供了可靠的平台。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 建立 基于 rna 干扰 纤维化 动物 受精卵 方法 | ||
【主权项】：
一种建立基于微RNA干扰的肝纤维化动物受精卵的方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)构建CAGG‑Sponges‑miR‑483质粒：选取NCBI上小鼠miR‑483序列，设计合成六拷贝的反义序列，六拷贝的反义序列的核苷酸序列为SEQ ID No.1，将该反义序列两端引入EcoR I的酶切位点，EcoR I分别单酶切六拷贝的miR‑483反义序列与含有启动子CAGG的pCAGGs载体，CIP对载体去磷酸化，纯化后，经T4连接酶将二者连接，连接产物测序正确后转化入感受态细胞DH5α，建立重组质粒CAGG‑Sponges‑miR‑483；(2)建立miR‑483稳定干扰的转基因小鼠的受精卵：以Sal I和Hind III双酶切上述重组质粒，电泳胶回收获得纯化的显微注射用转基因构件，该构件包括启动子CAGG，六拷贝的miR‑483反义序列和转录终止信号；将获得纯化的转基因构件经显微注射导入成活的受精卵中。
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