[发明专利]一种测定婴幼儿配方奶粉中OPO结构酯Sn-2位脂肪酸的检测方法

摘要

本发明方法属于食品检测领域，涉及一种测定婴幼儿配方奶粉中OPO结构酯Sn-2位脂肪酸的检测方法，尤其是涉及一种气相色谱法测定婴幼儿配方奶粉中OPO结构酯Sn-2位脂肪酸的检测方法。样品采用Bligh-Dyer提取法提取脂肪，将提取后的脂肪样品划在硅胶板上，经薄层色谱分离，取纯化的甘油三酯样品进行Sn-2单甘油酯的分离，加入氢氧化钠-甲醇溶液进行皂化，再加入三氟化硼甲醇溶液进行甲酯化反应，加入正庚烷提取，经0.45μm有机滤膜过滤。待测物经SP-2560毛细管色谱柱分离，氢火焰离子化检测器(FID)检测，外标法定量。本方法既能定性又能定量，且气相色谱法-FID检测器的精确度好、效率高，能够满足目前市场对婴幼儿配方奶粉中OPO结构酯Sn-2位脂肪酸评价要求，有较大的市场潜力。

主权项

一种测定婴幼儿配方奶粉中OPO结构酯Sn‑2位脂肪酸的检测方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)试样制备(脂肪提取)：采用Bligh‑Dyer提取法，量取5g奶粉于50mL塑料离心管中，加入5mL水，涡旋溶解混匀，加入10mL甲醇、10mL三氯甲院，40℃充分振荡30min，取出后以5000r/min离心3min，分液，用一次性吸管吸取下层溶液，过滤(装有0.45μm有机滤膜头的针管中加入2g无水硫酸钠)，然后用氮气吹干；(2)三酰甘油的分离：量取30‑40mL展开剂(正己烷+乙醚+98％甲酸＝70+30+1)倒入玻璃层析缸中，盖上盖子放置0.5‑1h，使层析缸中的展开液蒸气达到饱和。在硅胶G板上点样，先在离板底部2cm处用铅笔划一条直线，作为点样基线；用毛细管将提取后的脂肪样品划在硅胶板上(划在板上的目的是为了得到更多的分离产物)。点样完毕，将板置于通风处，放至溶剂完全挥发，再将薄层板放入展开缸中，点样端在下，浸入展开剂的深度为距薄层板底边0.5‑1.0cm，盖上玻璃盖；待展开液扩展至离上板边缘约1‑1.5cm处时，取出层析板，用铅笔在展开液前沿画线，待板上的展开液挥发完全，用2％的2′，7′‑二氯荧光素，喷雾显色，画出Rf＝0.69的三酰甘油谱带，用微型刮铲刮下置于10mL塑料管中；收集的硅胶中加入5mL无水乙醚，涡旋混匀，将上层乙醚转移至50mL离心管中，重复提取共三次，合并乙醚层，过0.45μm滤膜，氮吹吹干；(3)Sn‑2单甘油酯的分离：取0.1g纯化的甘油三酯样品置于10mL塑料管中(若室温下试样不是液体，将塑料管置于60℃‑65℃的水浴锅内，使之液化后即取出)，向已液化的试样中加入预先称重的约20mg的胰脂肪酶和2mL Tris‑HCl缓冲溶液(1mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液，用6mol/L的盐酸调节至pH＝8)，小心摇动；然后加入0.5mL胆酸钠溶液，0.2mL氯化钙溶液，盖上离心管盖，涡旋混匀后，立即将塑料管置于40℃水浴摇床振荡3min，期间拿出手摇再放入摇床，之后加入1mL盐酸溶液和2mL乙醚，盖上盖子，涡旋10s；两相分离：5000r/min离心3min，用一次性吸管将有机相吸出转移到试管里，过滤(在装有0.45μm有机滤膜的针管中加入2g无水硫酸钠)。氮吹将乙醚除去，约至200μL时停止；(4)皂化、甲酯化：将提纯过的Sn‑2单甘油酯置于40mL吹扫瓶中，加入10ml 0.5mol/L氢氧化钠‑甲醇溶液，80℃水浴加热10min，期间手摇两次，然后加入10mL三氟化硼甲醇溶液，继续煮沸10min后，冷水降温，加入1mL水和3mL正庚烷，涡旋提取，静置分层，取上层，过滤(在装有0.45μm有机滤膜的针管中加入2g无水硫酸钠)，滤液上机检测。(5)采用GB 5413.27‑2010婴幼儿食品和乳品中脂肪酸的测定方法一，测定棕榈酸在奶粉中的含量(mg/100g)(6)采用气相色谱仪，配FID检测器，气相色谱条件：色谱柱，SP‑2560，100m×0.25mm×0.20μm；载气，氦气；流速，1.0mL/min(恒流)；进样体积，1.0μL；进样口温度，250℃；检测器温度，260℃；柱温，130℃，以4℃/min升温至230℃(保持30min)；(7)计算公式：用面积归一法计算出Sn‑2棕榈酸占总棕榈酸比例。计算公式如下：式中：X：结构甘油三酯Sn‑2位棕榈酸的量占总棕榈酸含量的比例，单位百分之(％)。计算结果保留三位有效数字。