[发明专利]一种高通量快速克隆油菜抗旱基因的方法

摘要

本发明涉及一种高通量快速克隆油菜抗旱基因的方法，包括：1）对萌发的油菜幼苗进行干旱胁迫处理，处理后整株取样，获得干旱胁迫响应的总RNA库；2）获得mRNA并反转录合成双链cDNA，构建干旱胁迫转录组全长cDNA均一化文库；3）构建干旱胁迫转录组全长cDNA植物表达文库；4）构建超表达油菜干旱胁迫转录组全长cDNA的拟南芥突变体库；5）运用高通量的远红外热成像技术筛选前述获得的拟南芥突变体库，并进行抗旱胁迫表型鉴定，获得超表达油菜干旱胁迫转录组的抗旱拟南芥转基因植株；6）从获得的抗旱拟南芥转基因植株中克隆转入的引起抗旱表型的油菜干旱响应关键基因。该方法快速便捷，提高了植物抗旱基因的克隆效率。

主权项

一种高通量快速克隆油菜抗旱基因的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）对萌发的油菜幼苗进行干旱胁迫处理，处理后整株取样，CTAB法提取RNA，获得干旱胁迫响应的总RNA库；2）纯化总RNA库，获得mRNA并反转录合成双链cDNA，将合成的双链cDNA归一化处理后克隆入Gateway兼容载体，构建干旱胁迫转录组全长cDNA均一化文库；3）运用高通量的Gateway技术将上述cDNA均一化文库克隆入Gateway兼容的植物表达载体，构建干旱胁迫转录组全长cDNA植物表达文库；4）将cDNA植物表达文库电击转化农杆菌，获得干旱胁迫转录组全长cDNA农杆菌文库；用cDNA农杆菌文库转化拟南芥，构建超表达油菜干旱胁迫转录组全长cDNA的拟南芥突变体库；5）运用高通量的远红外热成像技术筛选前述获得的拟南芥突变体库，对筛选得到的干旱相关突变体进行抗旱胁迫表型鉴定，获得超表达油菜干旱胁迫转录组的抗旱拟南芥转基因植株；6）从获得的抗旱拟南芥转基因植株中克隆转入的引起抗旱表型的油菜干旱响应关键基因。