[发明专利]一种酶法制备莱鲍迪苷M的方法

摘要

本发明公开了一种酶法制备莱鲍迪苷M的方法，该方法利用番茄UDP‑糖基转移酶和土豆蔗糖合成酶，以莱鲍迪苷A和蔗糖为原料生产莱鲍迪苷M。本发明的方法首先利用基因工程技术获得UDP‑葡萄糖基转移酶和蔗糖合酶的高产重组菌株，然后收集生物酶粗品直接进行催化反应，反应体系中不添加UDP或UDP‑葡萄糖，以莱鲍迪苷A和蔗糖为原料，通过蔗糖合酶催化UDP‑葡萄糖高效循环，通过番茄UDP‑葡萄糖基转移酶的作用，催化莱鲍迪苷A生成莱鲍迪苷M。与已有的莱鲍迪苷M制备方法相比，工艺步骤短，成本低，具有重要的应用价值和良好的经济性。

主权项

1.一种酶法制备莱鲍迪苷M的方法，其特征在于，包括如下步骤：1）构建工程菌：克隆UDP－糖基转移酶基因和蔗糖合成酶基因，构建双酶共表达载体，并转移到大肠杆菌、酿酒酵母、毕赤酵母或谷氨酸棒杆菌中，获得过表达UDP－糖基转移酶基因和蔗糖合酶的工程菌；其中，所述UDP－糖基转移酶基因来自番茄，基因序列如SEQ.NO.1所示，所述蔗糖合成酶基因来自马铃薯，基因序列如SEQ.NO.3所示；2）制备莱鲍迪苷M：将构建好的工程菌发酵产酶，发酵得到的菌体超声或高压破碎，获得UDP‑糖基转移酶和蔗糖合成酶的粗酶液；以莱鲍迪苷A和蔗糖为原料，由制得的粗酶液中的UDP‑糖基转移酶催化莱鲍迪苷A进行转化反应制备得到莱鲍迪苷M；该过程生成的UDP再由蔗糖合成酶催化生成UDP‑葡萄糖；所述底物莱鲍迪苷A的初始反应浓度为2‑50 g/L，蔗糖与莱鲍迪苷A的质量比为1‑10，由共表达上述两个酶的工程菌制备的粗酶液在反应体系中的总蛋白浓度为2‑20 mg/mL。