[发明专利]一种提高无核葡萄杂交胚挽救成苗的方法

摘要

本发明属于植物育种技术领域，公开了一种提高无核葡萄杂交胚挽救成苗的方法，该方法在无核葡萄杂交胚败育前，利用摘心与环剥的物理措施促进胚珠与胚的体内发育，确定了二个南方无核葡萄杂交组合的胚败育挽救取样的适宜时间，确定了胚珠培养与胚萌发的培养基添加物、试管苗双芽茎段接种继代与继代培养基添加物等内容。应用本发明所获得的无核葡萄杂交胚发育率高，胚挽救苗整齐健壮，胚发育率达到了41.7％，成苗率达到了18.3％，继代培养成苗率达到了92％，其中健壮苗率达到81.8％，试管苗移栽成活率达到了97％，大大提高了杂交后代胚挽救成苗的基数，从而能得到更多的无核杂交后代植株群体，提高了南方开展无核葡萄杂交胚挽救成苗率，方法可操作性强、容易掌握。

主权项

一种提高无核葡萄杂交胚挽救成苗的方法，其特征在于：包括以下步骤，A.摘心环剥：无核葡萄母本新梢 长到6叶期，花序上留1叶进行摘心处理，在花前7‑10天对顶副梢进行第二次摘心处理，其余副梢留1叶摘心，在初花期人工去雄前进行顶副梢摘心与结果枝的环剥；B.杂交后取样、低温处理后接种胚珠：在初花期进行人工去雄授粉，在授粉后杂交种子败育的最佳取果期摘取幼果，幼果取回后4‑6℃低温处理，3天，剥取胚珠接种，选择加入第一外源添加物的B5液体培养基，25℃暗培养80‑90天，第一外源添加物为1‑2.5mg/L的IBA、0.5‑1.5mg/L的GA3、0.1‑0.5mg/L的6‑BA、50‑65g/L的蔗糖、0.5‑1.5g/L的活性炭；C.取裸胚接种：取胚珠，胚珠纵切剥取白色裸胚，接种到加入了第二外源添加物的WPM培养基上，光培养，第二外源添加物为0.4‑0.8mg/L的6‑BA、20‑40g/L的蔗糖、1‑2g/L的活性炭；D.继代扩繁：将30‑40天苗龄的胚挽救试管苗，双芽茎段接种在继代培养基1/2WPM上，继代培养基1/2WPM上加入第三外源添加物，第三外源添加物为0.1‑0.5mg/L的IBA、20‑40g/L的蔗糖、2‑3g/L的活性炭，光培养得试管苗；E.炼苗：对试管苗进行炼苗；步骤E中，炼苗方式为，试管苗移到室内自然光条件下培养2天；打开瓶盖培养2天；取出试管苗、洗净根系上培养基，栽入已装好用70％甲基托布津和1000倍灭菌泥炭的营养钵中，苗上盖塑料杯保湿，时间为7天；移到设施条件下长出2片新叶后定植，苗床土壤用30％恶霉灵消毒，即得到无核葡萄杂交苗植株。