[发明专利]一种扩张床吸附（EBA）技术制备纤维蛋白原的工艺方法

摘要

本发明提供一种制备纤维蛋白原的方法，包括下述步骤：1)以琼脂糖碳化钨‑DEAE离子交换介质为柱层析填料，制备扩张床作用层析柱；2)将血浆过步骤1)所述的层析柱进行初步纯化，收集纤维蛋白原初品；3)将步骤2)获得的纤维蛋白原初品进行酸沉去除杂质；4)将步骤3)获得的去除杂质的纤维蛋白原去除病毒；5)用MacroCap Q柱层析进一步纯化步骤4)去除病毒后的纤维蛋白原，获得目标纤维蛋白原溶液。本发明的工艺连续性和自动化程度提高，使残留的化学物质大大减少，提高产品的安全性和质量。

主权项

1.一种制备纤维蛋白原的方法，包括下述步骤：1)以琼脂糖碳化钨‑DEAE离子交换介质为柱层析填料，制备扩张床作用层析柱；2)将血浆过步骤1)所述的层析柱进行初步纯化，收集纤维蛋白原初品；3)将步骤2)获得的纤维蛋白原初品用酸沉淀去除杂质；4)将步骤3)获得的去除杂质的纤维蛋白原去除病毒；5)用MacroCap Q柱层析进一步纯化步骤4)去除病毒后的纤维蛋白原，获得目标纤维蛋白原溶液；其中步骤1)所述的琼脂糖碳化钨‑DEAE离子交换介质按照下述方法制备：a)将琼脂糖与碳化钨反应制备琼脂糖‑碳化钨复合物珠粒，再将所述琼脂糖‑碳化钨复合物珠粒与交联剂环氧氯丙烷反应制备交联琼脂糖‑碳化钨复合物珠粒；其中琼脂糖用量为3％～9％重量，在90～95℃条件下，熔融共混琼脂糖和碳化钨，碳化钨和琼脂糖的质量比为1:0.2‑～1:2，交联剂环氧氯丙烷添加量为0.1‑0.3mL/mL凝胶；b)通过烯丙基化、氧化和溴化分步反应活化步骤a)制备的交联琼脂糖‑碳化钨复合物珠粒；c)在步骤b)活化的交联琼脂糖‑碳化钨复合物珠粒上偶联2‑氯三乙胺配基，获得所述琼脂糖碳化钨‑DEAE离子交换介质；其中所述步骤a)中，以反相悬浮液热再生方式制备琼脂糖‑碳化钨复合物珠粒，其中使用的油相有机溶剂为石蜡、石油醚、氯苯、真空油或其中两种的混合物，琼脂糖水溶液和有机溶剂的体积比为6：1～2：1；所述步骤b)中，通过添加烯丙基缩水甘油醚开环联接烯丙基，烯丙基缩水甘油醚的添加量为1～4mmol/mL凝胶，以三氟化硼乙醚为催化剂，二氧六环为溶剂反应；交联琼脂糖‑碳化钨复合物珠粒内孔联接的烯丙基以油相保护，交联琼脂糖‑碳化钨复合物珠粒外表层联接烯丙基以KMO4、H2O2水相氧化，油相保护使用的有机溶剂为苯、甲苯、乙苯、丙苯或者其中两种的混合物；烯丙基化、氧化后的溴化过程中，滴加Br2的量为0.03‑0.1mL/ml凝胶；所述步骤c)中活化的交联琼脂糖‑碳化钨复合物珠粒偶联2‑氯三乙胺配基过程中，将活化的交联琼脂糖‑碳化钨复合物珠粒经过2.5‑3.5mol/L NaOH溶液处理后偶联2‑氯三乙胺，2‑氯三乙胺的添加量为6‑9mmoL/mL凝胶。