[发明专利]一种兽用伪狂犬弱毒活疫苗的规模化生产方法

摘要

本发明公开了一种兽用伪狂犬弱毒活疫苗的规模化生产方法，是利用细胞悬浮工艺培养伪狂犬病毒弱毒株，使反应器内悬浮培养的BHK21‑C13细胞密度大于或等于2×106细胞/mL，然后用含伪狂犬病悬浮种毒的病毒维持液进行培养，再将收获的伪狂犬弱毒病毒液经澄清、配苗、分装、冻干后得到兽用伪狂犬弱毒活疫苗。本发明能够实现伪狂犬弱毒病毒大量增殖，大大提高病毒滴度与抗原产量，实现工艺自动化，提高了疫苗的质量，不仅能提高BHK21‑C13细胞密度，自动监控细胞生长或病毒繁殖的最适生化条件，提高病毒滴度，而且工艺规模放大相对容易，疫苗质量稳定、批间差小，生产和应用前景广阔。

主权项

一种兽用伪狂犬弱毒活疫苗的规模化生产方法，是利用细胞悬浮工艺培养伪狂犬病毒弱毒株，使反应器内悬浮培养的BHK21‑C13细胞密度达到2‑4×106细胞/mL，然后用含伪狂犬病悬浮种毒的病毒维持液进行培养，再将收获的伪狂犬弱毒病毒液经澄清、配苗、分装、冻干后得到兽用伪狂犬弱毒活疫苗，每0.1mL所述伪狂犬弱毒病毒液中病毒含量≥106.0TCID50；反应器内悬浮培养BHK21‑C13细胞的营养液或悬浮专用培养基为：在BBSM培养基中按1.15g/L加入碳酸氢钠，再按体积百分比添加3％‑5％新生牛血清，调节pH值至7.2±0.5；培养伪狂犬生产用悬浮病毒液过程为：将反应器内培养合格的BHK21‑C13悬浮细胞弃掉悬浮专用培养基，加入病毒维持液恢复至原培养体积，再按1％体积加入伪狂犬悬浮种毒，在36.0±0.5℃，pH值7.40‑7.60，DO值20％‑60％，转速60‑110rpm下培养，待细胞病变≥75％时收获病毒液。