[发明专利]一种制备(2S，3R)-2-苯甲酰氨甲基-3-羟基丁酸甲酯的方法

摘要

本发明公开了一种制备(2S，3R)‑2‑苯甲酰氨甲基‑3‑羟基丁酸甲酯的方法，该方法包括：制备含羰基还原酶基因的工程菌和含葡萄糖脱氢酶基因的工程菌；分别制备两种工程菌的静息细胞悬液；将两种静息细胞悬液混合后，再与底物外消旋2‑苯甲酰氨甲基‑3‑羰基丁酸甲酯、氢供体和辅因子混合，进行不对称还原反应，制得(2S，3R)‑2‑苯甲酰氨甲基‑3‑羟基丁酸甲酯；羰基还原酶基因的碱基序列如SEQ ID NO.1所示，所述葡萄糖脱氢酶基因的碱基序列如SEQ ID NO.2所示。该方法可催化底物外消旋2‑苯甲酰氨甲基‑3‑羰基丁酸甲酯反应生成(2S，3R)‑2‑苯甲酰氨甲基‑3‑羟基丁酸甲酯，提高了产物的转化率和纯度。

主权项

1.一种制备(2S,3R)-2-苯甲酰氨甲基-3-羟基丁酸甲酯的方法，其特征在于，包括：(1)制备含羰基还原酶基因的工程菌和含葡萄糖脱氢酶基因的工程菌；所述的工程菌含有表达载体pET-30a(+)，宿主细胞为大肠杆菌BL21(DE3)；(2)分别制备两种工程菌的静息细胞悬液；静息细胞悬液的制备方法，包括：将所述的工程菌接种到含卡纳霉素的培养基中，摇床活化后，扩大培养至OD600值达到0.8～1.2时，加入诱导剂，继续培养，离心收集细胞，用缓冲液重悬，获得所述的静息细胞悬液；所述的诱导剂为IPTG，诱导剂的浓度为0.5～0.8mM；两种静息细胞悬液的混合液中，含羰基还原酶的静息细胞与含葡萄糖脱氢酶的静息细胞的质量比为4：1～1：2；(3)将两种静息细胞悬液混合后，再与底物外消旋2-苯甲酰氨甲基-3-羰基丁酸甲酯、氢供体和辅因子混合，进行不对称还原反应，制得(2S,3R)-2-苯甲酰氨甲基-3-羟基丁酸甲酯；所述羰基还原酶基因的碱基序列如SEQ ID NO.1所示，所述葡萄糖脱氢酶基因的碱基序列如SEQ ID NO.2所示；所述的氢供体为葡萄糖，所述的辅因子为NADP+/NADPH；不对称还原反应中，所述底物浓度为2.5～500g/L，含羰基还原酶的静息细胞的浓度为0.1g干重/L～25g干重/L，含葡萄糖脱氢酶的静息细胞的浓度为0.1g干重/L～25g干重/L，氢供体的浓度为5～750g/L，辅因子的浓度为0～0.5mM；所述不对称还原反应的温度为25～40℃，反应缓冲液pH为6.0～8.0。