[发明专利]抗凝血酶Ⅲ活性测定试剂盒的制备方法

摘要

本发明涉及一种临床检测试剂制备方法，具体为抗凝血酶III活性测定试剂盒的制备方法，Tris-HCl溶解凝血酶冻干粉末和肝素钠制成S1试剂，将凝血酶发色底物S-2238或Sar-Pro-Arg-P-nitroanilide用Tris-HCl溶解制成S2试剂，S1试剂和S2试剂冻干形成S1冻干品和S2冻干品；含Tris-HCl叠氮化钠溶液复溶S1冻干品配制成S1冻干复溶试剂；超纯水溶解S2冻干品制成S2冻干复溶试剂；多人份混合血浆进行冻干，制备得到ATIII校准品；对ATIII校准品进行定值，定值范围ATIII％为90％～110％；采用定值的ATIII校准品、S1冻干复溶试剂和S2冻干复溶试剂制作标准曲线，线性相关系数大于0.99；待测血浆样品中加入S1冻干复溶试剂和S2冻干复溶试剂后进行显色反应。该方法制备得到的试剂盒成本低，线性范围宽，稳定性好，操作简单。

主权项

抗凝血酶III活性测定试剂盒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)使用PH8.4的10～50mmol/L Tris‑HCl溶液将凝血酶冻干粉末和肝素钠溶解，配制成S1试剂，S1试剂的凝血酶浓度为5～20IU/mL，肝素浓度为0.2～10IU/mL；(2)将发色底物S‑2238或Sar‑Pro‑Arg‑P‑nitroanilide用PH7.0的10～50mmol/LTris‑HCl溶解，配制成底物浓度为2～5μmol/mL的溶液，为S2试剂；(3)分别在S1试剂和S2试剂中加入助剂进行冻干，形成S1冻干品和S2冻干品；S1试剂加入的助剂在S1试剂中的含量为：BSA为0.5～5％，KCl浓度为15～250mmol/L、EDTA2K浓度为1～10mmol/L、抑肽酶0.1～5IU/mL、聚乙二醇6000浓度为1～5mg/ml；S2试剂加入的助剂在S2试剂中的质量比例为：BSA为0.5～5％、甘露醇为1～5％；(4)使用含有PH8.4的10～50mmol/L Tris‑HCl、0.1～0.5mg/ml叠氮化钠的S1试剂复溶液复溶S1冻干品，配制成S1冻干复溶试剂；使用超纯水溶解S2冻干品，配制成S2冻干复溶试剂；(5)采取新鲜多人份混合血浆，加入稳定剂、防腐剂物质进行冻干，制备得到ATIII校准品；采用WHO/BS/10.2146标准品，在全自动凝血仪CA‑1500上对ATIII校准品进行定值，定值范围ATIII％为90％～110％；(6)在全自动凝血仪CA‑1500上，采用定值的ATIII校准品、S1冻干复溶试剂和S2冻干复溶试剂制作标准曲线，线性相关系数大于0.99；(7)使用待测血浆样品在全自动凝血仪CA‑1500上进行检测，检测得到待测血浆样本的OD值，机器自动计算出待测血浆样本中ATIII的活性值，检测程序如下：16μl待测血浆样品中加入175μl S1冻干复溶试剂和33μl S2冻干复溶试剂后进行显色反应，整个过程不调整仪器自身的任何参数。