[发明专利]一种产生物表面活性剂的混合菌及其筛选方法

摘要

本发明涉及一种油田微生物采油技术，尤其涉及一种产生物表面活性剂的混合菌及其筛选方法；混合菌包括里氏木霉、施氏假单胞菌和鼠李糖乳杆菌，其中里氏木霉购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC No.3.3711，施氏假单胞菌购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC No.1.10279，鼠李糖乳杆菌购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC No.1.2568；通过采油菌挑选、菌株活化及培养、血平板法初筛、排油圈法复筛获得。

主权项

1.一种产生物表面活性剂的混合菌，其特征在于：混合菌包括里氏木霉、施氏假单胞菌和鼠李糖乳杆菌，其中里氏木霉购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC No.3.3711，施氏假单胞菌购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC No.1.10279，鼠李糖乳杆菌购自中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号为CGMCC No.1.2568，里氏木霉的活菌数为总活菌数的10‑20％，施氏假单胞菌的活菌数为总活菌数的20‑30％，鼠李糖乳杆菌的活菌数为总活菌数的50‑70％，所述产生物表面活性剂的混合菌的筛选方法，依次包括以下步骤：S1、采油菌挑选；包括以下11种菌株：购自中国普通微生物菌种保藏管理中心的：购自美国典型菌种保藏中心(ATCC)的：43052^TM诺卡氏菌Nocardioides luteus Prauser；39323^TM拟孢囊菌Kibdelosporangium aridum subsp.aridum Shearer et al；33911^TM脱硫杆菌Desulfobacter postgatei；购自英国典型菌种保藏中心(NCTC)的：NCTC 10651链杆菌Streptobacillus moniliformis；S2、菌株活化及培养；将冷藏的11株微生物采油菌株转接于斜面培养基上，37℃培养2d；取斜面活化后的种子一环，转接于种子液体培养基的三角瓶中，37℃摇床培养16h，转速为160r/min；以4％的接种量将种子液种于初始发酵培养基中(200mL/500mL)，37℃摇床培养72h，转速为160r/min；S3、血平板法初筛：采用血平板法初步筛选产生物表面活性剂的菌株，得到初筛发酵液；用无菌牙签将待筛选菌株点种在冷却的血平板培养基上，每个菌种重复三次作为平行实验，37℃培养24h～48h；S4、排油圈法复筛：采用排油圈法复筛步骤S3中的初筛发酵液，得到产生物表面活性剂的混合菌。