[发明专利]用于纯化非复合的肉毒杆菌神经毒素的方法和系统

摘要

提供了用于色谱纯化肉毒杆菌神经毒素的方法和系统。这些方法和系统允许以高纯度和产量有效纯化非复合形式的肉毒杆菌神经毒素，所述非复合形式的肉毒杆菌神经毒素可在药物制剂中用作活性成分。

主权项

1.一种用于纯化非复合的A型肉毒杆菌毒素的方法，所述方法包括：(a)提供包含粗制的非复合的A型肉毒杆菌毒素的混合物，所述粗制的非复合的A型肉毒杆菌毒素与天然非毒素蛋白解离；所述混合物通过以下获得：(i)使得包含A型肉毒杆菌毒素的发酵培养物经受酸沉淀，获得不溶的酸沉淀物；(ii)浓缩来自步骤(i)的酸沉淀，获得浓缩的样品；(iii)使得所述样品在以下条件下经受核酸酶消化：减少宿主细胞核酸含量，并且维持A型肉毒杆菌毒素与非毒素蛋白的复合物；(iv)从来自步骤(iii)的样品除去细胞碎片，获得净化的样品；(v)在以下条件下用来自步骤(iv)的净化的样品装载疏水相互作用柱:允许通过所述疏水相互作用柱俘获所述A型肉毒杆菌毒素复合物，并且允许杂质流过该柱；(vi)从所述步骤(v)的疏水相互作用柱洗脱所述A型肉毒杆菌毒素复合物；和(vii)在以下条件下解离从步骤(vi)获得的A型肉毒杆菌毒素复合物：解离所述复合物并且获得包含从天然非毒素蛋白解离的粗制的非复合的A型肉毒杆菌毒素的混合物；(b)在以下条件下将来自步骤(a)的包含从天然非毒素蛋白解离的所述粗制的非复合的A型肉毒杆菌毒素的混合物装载到阴离子交换柱上：允许通过所述阴离子交换柱俘获所述非复合的A型肉毒杆菌毒素；(c)从步骤(b)的阴离子交换柱洗脱所述非复合的A型肉毒杆菌毒素，以得到包含所述非复合的A型肉毒杆菌毒素的洗脱液；(d)在以下条件下用步骤(c)的来自所述阴离子交换柱的所述洗脱液装载阳离子交换柱：允许通过所述阳离子交换柱俘获所述非复合的A型肉毒杆菌毒素；和(e)从步骤(d)的阳离子交换柱洗脱纯化的非复合的A型肉毒杆菌毒素。