[发明专利]提取木质纤维素厌氧发酵物料微生物DNA的方法及其成套试剂

摘要

本发明公开了提取木质纤维素厌氧发酵物料微生物DNA的方法及其成套试剂。本发明所提供的方法，包括下述步骤S1)和S2)：S1)用洗脱液洗下物料上的微生物，得到微生物洗脱液，除去所述微生物洗脱液中的杂质，得到所述微生物；S2)提取所述微生物的DNA得到所述微生物DNA；所述洗脱液由溶剂和溶质组成，所述溶剂为水，所述溶质及其浓度分别为9.0g/L氯化钠、0.12g/L氯化钾、0.24g/L氯化钙、0.2g/L碳酸氢钠和0.15g/L磷酸二氢钾。实验证明，本发明的提取木质纤维素厌氧发酵物料微生物DNA的方法及其成套试剂可以用来提取不同木质纤维素厌氧发酵物料的微生物DNA。

主权项

1.提取发酵物料中的微生物DNA的方法，包括下述步骤S1)和S2)：S1)用洗脱液洗下物料上的微生物，得到微生物洗脱液，除去所述微生物洗脱液中的杂质，得到所述微生物；S2)提取所述微生物的DNA得到所述微生物DNA；所述发酵物料为含木质纤维素的物质经过发酵得到的发酵产物；所述发酵为厌氧发酵；所述洗脱液由溶剂和溶质组成，所述溶剂为水，所述溶质及其浓度分别为8‑10g/L氯化钠、0.1‑0.2g/L氯化钾、0.2‑0.3g/L氯化钙、0.1‑0.3g/L碳酸氢钠和0.1‑0.2g/L磷酸二氢钾；所述除去所述微生物洗脱液中的杂质包括以下步骤：将所述微生物洗脱液进行离心，使微生物进入沉淀中，收集沉淀，将该沉淀命名为沉淀A1；向所述沉淀A1中加入稳定剂，得到微生物‑稳定剂混合液；除去所述微生物‑稳定剂混合液中的杂质，得到所述微生物；所述稳定剂由溶剂和溶质组成，所述溶剂为水，所述溶质及其浓度分别为5‑7mM Tris‑HCl和2‑4mM乙二胺四乙酸，所述稳定剂的pH为7.5‑8.5；所述除去所述微生物‑稳定剂混合液中的杂质包括以下步骤：将所述微生物‑稳定剂混合液进行离心，使微生物进入沉淀中，收集沉淀，将该沉淀命名为沉淀A2；向所述沉淀A2中加入洗涤液，得到微生物‑洗涤液混合液；除去所述微生物‑洗涤液混合液中的杂质，得到所述微生物；所述洗涤液由溶剂和溶质组成，所述溶剂为水，所述溶质及其浓度分别为50‑70mM Tris‑HCl、10‑20mM EDTA、5.5‑6.0g/L NaCl和10‑20g/L PVP‑40，所述洗涤液的pH为7.5‑8.5；所述所述微生物为吸附在发酵物料上的微生物；所述S2)包括向所述微生物中加入成套裂解试剂，得到微生物裂解液；除去所述微生物裂解液中的杂质，得到所述微生物DNA；所述成套裂解试剂由SDS裂解液、蛋白酶K、溶菌酶、纤维素酶、木聚糖酶和GuSCN溶液组成；所述SDS裂解液由水和溶质组成，所述溶质及其浓度分别为90‑110mM Tris‑HCl、30‑50mM EDTA、7‑7.5g/500mL NaCl、15‑25g/500mL SDS和5‑15g/500mL PVP‑40，所述SDS裂解液的pH为7.5‑8.5；所述GuSCN溶液由水和溶质组成，所述溶质及其浓度分别为90‑110mM Tris‑HCl和55‑65g/100mL异硫氰酸胍，所述GuSCN溶液的pH为6.0‑6.5。