[发明专利]一种重组单纯疱疹病毒的中试生产工艺

摘要

一种重组单纯疱疹病毒的中试生产工艺，本发明采用生物反应器（Bioreactor）CelliGen微载体悬浮培养的方式进行大规模细胞培养，经细胞种植、循环培养、病毒接种、介质补充、细胞收集和细胞冻融等生产流程，最终进行病毒纯化的生产工艺。优点是：在本发明中，由于采用了第二代生物反应器进行悬浮培养方式等一系列先进和严格的生产工艺，保证了高纯度、高得率和高生物活性的重组单纯疱疹病毒制剂的获得，为重组疱疹病毒作为基因治疗载体及临床应用提供了应用前景。

主权项

一种重组单纯疱疹病毒的纯化方法，其特征在该方法包括如下步骤：(I).将在Vero细胞中扩增得到的重组单纯疱疹病毒上清液中加入5%的PEG8000，4^oC搅拌6个小时或过夜，4^oC 13500g离心2小时；(II).沉淀用TNMC缓冲液溶解，并在溶液中加入n‑十二烷基‑β‑D‑麦芽苷促进沉淀的溶解；(III).制备蔗糖密度梯度，将浓缩的mtHSV溶液加于蔗糖密度梯度顶层，37 500 g 离心力在4^oC离心18小时；(IV).将离心管底部刺穿，按一定体积量等体积收集，收集10管，取每管收集液的一部分做蛋白质电泳染色和Western blotting鉴定分析，将经鉴定分析确定了的病毒含量和纯度高的收集管冻存于‑80^oC或液氮罐中。