[发明专利]家兔肾脏在体低温机械灌注模型及其构建方法

摘要

本发明属于医学动物模型技术领域，具体为一种家兔肾脏在体低温机械灌注模型及其构建方法。作为一种研究工具，该模型复制肾移植低温机械灌注过程，其特点是采用了在体自体肾移植方式，构建步骤包括术前准备；麻醉、固定、备皮，常规开腹；夹闭肾蒂腹腔探查；再灌注；在体模拟肾脏体外低温机械灌注（MP）保存；血管缝合；膀胱造瘘；右肾切除；关闭腹腔；术后维持。本模型消除了由同种异体的供肾所导致的免疫排斥反应，同时由于并未将肾脏完全离体，这使得血管缝合变得简单，缝合时间缩短，血管损伤减少，当用于研究MP机制时，减少了这些因素的干扰，且该模型操作简单、可重复性好。

主权项

一种家兔肾脏在体低温机械灌注模型的构建方法，其特征在于具体步骤如下：（1）术前准备每次挑选两只3.2?3.8kg的雄性家兔在术前36?48h撤去饲槽，术前禁食36?48h，但需要给予充足水分；（2）麻醉、固定、备皮，常规开腹（3）夹闭肾蒂?腹腔探查????用棉垫和纱布保护切口边缘，将腹腔内脏器稍向右扒开，用纱布遮盖，用45.0℃生理盐水时刻保湿保温；暴露左肾并游离左输尿管；钝性分离肾动静脉，注意分离静脉时，动作轻柔，防止拉伤撕破；分离动脉时，要确定有无动脉畸形或多支动脉，动脉鞘要分离干净，分离长度为1.5?2cm；分离完成后，用动脉夹先夹闭输尿管再同时夹闭肾动静脉，在夹闭的一瞬间，同时开始计时,夹闭时间为25min或35min；用组织钳简易夹闭切口皮肤，关闭腹腔，维持家兔基础体温（38±0.5℃）；从左耳缘静脉抽取血液，进行血气分析；（4）再灌注????在到达夹闭时间之前1min松开组织钳，打开腹腔及暴露左肾，在到达夹闭时间那一刻松开两个动脉夹；观察肾脏颜色质地，理应见到肾脏变红变软，无瘀斑，动脉恢复搏动，注意保护肠道，并开始计时，用组织钳简易夹闭切口皮肤，关闭腹腔，维持家兔基础体温，再灌注时间为1小时；（5）模拟肾脏体外低温机械灌注保存????在到达1小时之前，提前30min松开组织钳，打开腹腔及暴露左肾，注意保护肠道，此时将5%葡萄糖溶液换成羟乙基淀粉溶液，静注，做腹部横向切口，切缘与左肾蒂平行，长度为7?9cm，使横向切口与原切口呈横“T”形，并止血，止血完成后，右耳缘静脉推注0.3ml（1875?IU）肝素，推注完成后开始准备肾动脉穿刺装置（静脉留置针、输液器及4℃肝素化的枸橼酸肾脏保护液）；游离左肾，将左肾与周围组织分离，切勿将输尿管及肾蒂切断，并结扎止血，防止周围组织渗血；在1h到达的时刻，用动脉夹同时夹闭肾动静脉，再用另一只动脉夹夹闭输尿管，然后在肾动脉上带上两根3?0慕思线备用，左手牵近心端的线，右手使用静脉留置针穿刺肾动脉；准备碎冰、4℃枸橼酸肾脏保存液及肾袋；穿刺完成后，打开输液器，待肾脏颜色变白后，用留置针的针头轻轻点刺肾静脉，此时有水柱涌出，观灌注速度，防止留置针滑脱或阻塞，然后结扎远心端，注意不要过紧或过松，防止滑脱，再结扎近心端；将肾套在肾袋内，向肾袋内注入4℃枸橼酸肾脏保存液同时收住肾袋口，不宜过紧，防止留置针阻塞；注意观察流注速度，确定流注速度未变化后，适当移动兔子的位置，使左肾能从横向切口中牵出体外，切记不要拉断肾动静脉和输尿管；将保存有肾脏的肾袋脱出家兔左侧体外，在体保存在装有冰水混合物的圆盘中，此时可以装上lifeport灌注仪，进行低温机械灌注保存，完成后，缝合“T”型伤口和腹部正中切口皮肤，恢复腹温，时刻观察lifeport灌注仪的灌注流量及机器运转状况（压力为60mmHg，流量控制在15?20ml/min），此时可以将羟乙基淀粉溶液换成5%葡萄糖溶液，在体进行肾脏机械灌注4h,?在这4h内监测家兔生命体征，时刻保持盘子内有充足的碎冰，确定引流管通畅，保存到第2h时，进行第二次血气分析；（6）血管缝合????在到达4h之前，提前20min检测第三次血气分析，同时准备50ml?4℃乳酸林格氏溶液，5ml碳酸氢钠，2ml肝素，2ml呋噻米，50ml肝素氯化钠和50ml?4℃生理盐水；提前5min打开正中切口及左腹横向切口，撤去lifeport灌注仪，停止灌注，同时换上羟乙基淀粉，静注1秒/滴；向肾脏中注入4℃乳酸林格氏溶液50ml以冲走残留于肾脏中的枸橼酸肾脏保存液；使用10?0带针缝合线先进行静脉缝合，再将动脉留置针取出后用10?0带针缝合线进行动脉缝合，在缝合血管时，要时刻注意肠道的保湿保温，并留意兔子的生命体征，血管缝合完毕后，肾动静脉远心端夹闭试漏，即打开两只动脉夹，确定动静脉有无出血，有无狭窄，恢复肾脏血供，此时耳缘静脉推注0.2ml肝素、0.5ml呋塞米和慢推5ml?5%碳酸氢钠，观察兔子的生命体征和肾脏状况，进行第四次血气分析；逐层细致关闭左腹横向切口，此时，准备造瘘管；（7）膀胱造瘘????确定造瘘位置，使用荷包缝合法，不要拉伤膀胱，此时耳缘静脉推注呋塞米；（8）右肾切除????分离右肾蒂并双重结扎，分离输尿管并双重结扎，游离肾周围组织，结扎止血，剪断肾蒂和输尿管，右肾切除，止血，此时耳缘静脉推注呋塞米；（9）关闭腹腔????清点器械，腹腔冲洗后逐层细致关闭腹腔，此时应将羟乙基淀粉换成乳酸林格氏溶液，静注；松开家兔固定装置，用吹风机将兔子吹干，尽快恢复体温；（10）术后维持术后24h内监测兔子的生命体征，尿量及血气分析，及时纠正酸碱平衡紊乱，补足血容量，有助于恢复左肾脏功能。