[发明专利]一种杂交、回交改良家蚕抗血液型脓病的方法

摘要

本发明公开了一种用杂交、回交改良家蚕抗血液型脓病的方法，采用通过抗血液型脓病家蚕品系与常规优良品种杂交、回交和自交三种方式组成的充血循环，逐步把现行优良家蚕品种的基因导入到抗血液型脓病的蚕种质中，同时采用蛾区半分法添食BmNPV病毒液的选择手段，在保持抗BmNPV主效基因不丢失的情况下，提高其经济性状，以达到现行生产用种的需求。然后再用改良的抗血液型脓病蚕品系与对应的现行优良品种杂交，生产一代杂交种。这种方法生产的一代杂交种，对血液型脓病具有高度的抵抗性，同时经济性状优良，在全国蚕区的农村推广应用，深受蚕农欢迎。

主权项

一种用杂交、回交改良抗BmNPV家蚕种质的方法，其特征在于：1)开展家蚕种质资源的抗BmNPV调查，获得抗BmNPV能力非常强的蚕资源的种质R；2)用抗BmNPV的家蚕种质R的雌蚕与常规优良品种的雄蚕杂交，产生F1代；3)混合饲养F1代，选择经济性状优良的F1代个体的雌蚕再与常规品种杂交，产生BC1代，完成一个回交充血循环；4)BC1代混合收蚁，蚁蚕经口添食BmNPV病毒液，感病个体死亡，抗病个体存活；选择经济性状优良的BC1抗病个体的雌蚕再与常规品种杂交，产生BC2；5)以BC2为起点，重复上述步骤4) ，进行连续改良，以保证现行品种的优良经济性状导入抗病种质的同时不丢失抗病基因；6)连续回交4次后经添食BmNPV病毒液留下的个体设为B1代，将B1自交产生B2代，B2代产生至少20个单蛾；7)B2代所有蛾区采用蛾区半分法收蚁，即所有蛾区一分为二取半蛾单独饲养，蚁蚕用BmNPV病毒液筛选，发生死亡的蛾区一律淘汰，个体全部存活的蛾区取同蛾区内的雌雄自交制种，产生B3代，每蛾区至少留10个单蛾；8)B3代继续采用步骤7)所示方法，对每1个蛾区进行抗BmNPV筛选，留下每个个体都抗病的蛾区，此时蛾区所有个体的抗病基因纯合，设立抗病基因纯合的抗病小系，其它有死亡个体的蛾区则全部淘汰；9)基因纯合的抗病小系再经过经济性状的选择，择优留种；与相应的常规优良品种对交种进行杂交，生产的一代杂交种携带杂合抗病基因，对血液型脓病具有高度抵抗性；所述种质R的筛选步骤为：a)将保存的不同品种蚕卵正常催青，混合蚁量收蚁，每品种收0.4g蚁量，新鲜桑叶饲养至1龄眠；待2龄起蚕时，每品种数50头×9区，置于培养皿中，待用；b)设定5级病毒浓度梯度及一个空白对照，各级浓度梯度的倍数一般为10倍，依次向下逐级稀释；添食NPV病毒的最高浓度为1.85×109PIB/ml，以10倍向下逐级稀释，最低浓度为1.85×105PIB/ml，共5级浓度；每个浓度设3个重复，每个重复区50头蚕；c)选取同品种、同叶质的桑叶，打成直径为3厘米的小圆片桑叶；d)用移液枪吸取0.1ml的病毒液均匀地涂抹于圆形叶片上，每区蚕喂5片添毒叶；e)待蚕完全吃完添毒叶后再改用普通桑叶饲养，正常的眠起处理；f)每天早上8点、下午2点观察记录蚕的生长发育情况，一旦出现病蚕要及时挑出，以免发生交叉感染；g)用spss v16.0处理统计数据，得到每个试验品种的LC50，获得BmNPV的半致死浓度(LC50)达109PIB/ml，为普通家蚕的1000倍以上即为种质R。