[发明专利]一种制备粘性末端DNA组装底物的方法在审
| 申请号： | 201510189534.8 | 申请日： | 2015-04-20 |
| 公开（公告）号： | CN104805074A | 公开（公告）日： | 2015-07-29 |
| 发明（设计）人： | 曹君利;张松;李燕强;宋昱 | 申请（专利权）人： | 徐州医学院 |
| 主分类号： | C12N15/10 | 分类号： | C12N15/10 |
| 代理公司： | 四川君士达律师事务所 51216 | 代理人： | 芶忠义 |
| 地址： | 221004 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种制备粘性末端DNA组装底物的方法，通过对PCR扩增引物一些位点进行硫代磷酸修饰，然后利用这对修饰引物进行PCR扩增，再利用5′→3′核酸外切酶对PCR产物进行消化，由于硫代磷酸可抑制外切酶进一步切割，从而形成一些具有粘性末端的DNA组装产物，与此粘性末端相连接的另一组装产物可以按以上方法制备，当在连接酶作用下，可以很容易进行两产物的组装。本发明方法实现了对核酸分子组装不需要内切酶，因此不受核酸分子的内切酶位点影响，简单实用。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 制备 粘性 末端 dna 组装 方法 | ||
【主权项】：
一种制备粘性末端DNA组装底物的方法，其特征在于:包括以下步骤：对PCR扩增引物5’端第2个位点以后的任意一磷酸二脂键位点进行硫代磷酸修饰，通过PCR扩增，在具有5′→3′核酸外切酶活性的DNA外切酶作用下，获得3′突出游离端的粘性末端的DNA组装产物；利用T7连接酶将获得的DNA组装产物进行组装。
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