[发明专利]一种甘氨酰-L-谷氨酰胺手性异构体的分离检测方法

摘要

本发明提供了一种甘氨酰-L-谷氨酰胺手性异构体的衍生化分离检测方法，属分析化学领域。该方法在甘氨酰-L-谷氨酰胺进入液相色谱柱之前用衍生化试剂进行衍生化，其衍生化试剂为N^α-(5-氟-2，4-二硝基苯基)-L-氨基酸类化合物。分离测定所用方法为高效液相色谱法。使用的色谱柱为碱基化十八烷基键合硅胶为填料的色谱柱。分离检测步骤主要包括：①样品溶液及衍生溶液配制；②衍生化反应；③衍生化反应后处理；④用高效液相色谱仪分离测定。本发明提供的柱前衍生化方法具有反应条件温和、衍生产物稳定，反应速度快、副反应少、过量衍生化试剂不干扰测定且使用普通色谱柱即可实现甘氨酰-L-谷氨酰胺及其手性异构体分离等优点。

主权项

一种分离测定甘氨酰‑L‑谷氨酰胺手性异构体的方法，其特征在于：甘氨酰‑L‑谷氨酰胺在进柱前用衍生化试剂进行衍生化，其衍生试剂为N^α‑(5‑氟‑2，4‑二硝基苯基)‑L‑氨基酸类化合物，所述的衍生化试剂选自N^α‑(5‑氟‑2，4‑二硝基苯基)‑L‑丙氨酰胺、N^α‑(5‑氟‑2，4‑二硝基苯基)‑L‑苯丙胺酰胺、N^α‑(5‑氟‑2，4‑二硝基苯基)‑L‑脯氨酰胺或N^α‑(5‑氟‑2，4‑二硝基苯基)‑L‑缬氨酰胺中的一种，其分离测定过程包括：①取甘氨酰‑L‑谷氨酰胺，用水溶解并稀释制成每1ml中约含20～40mg的溶液；②取N^α‑(5‑氟‑2，4‑二硝基苯基)‑L‑氨基酸类化合物试剂适量，精密称定，加有机溶剂溶解并稀释制成10mg/ml的溶液，摇匀，置于冰箱冷藏(2℃～8℃)保存；③取甘氨酰‑L‑谷氨酰胺溶液、衍生化试液和碳酸盐溶液，混匀；④于20～60℃反应2～7小时，反应完毕加入1～2mol/L的盐酸溶液；⑤反应物在预置五氧化二磷与氢氧化钾的干燥系统中干燥至溶剂充分挥尽后，加二甲基亚砜或N，N‑二甲基甲酰胺使残留物溶解，滤过，滤液作为供试品溶液；⑥用高效液相色谱法分离测定上一步的供试品溶液。