[发明专利]一种多倍体金线莲有机培养一次性成苗诱导方法

摘要

本发明属于药用植物金线莲染色体增加倍数后一次性成苗有机培养的方法，更具体涉及我国传统珍贵药材兰科开唇兰属一种多年生草本植物野生金线莲植株无菌体系建立及染色体增加倍数增加倍数后多倍体一次性成苗有机培养的方法。本方法通过无菌体系的建立、秋水仙素的多倍体诱导、增殖培养、移栽，获得多倍体金线莲植株健壮完整种苗。本发明通过进行金线莲多倍体诱导并进行产业化生产，为获得生态适应性强、药用成分含量高的金线莲多倍体新品种和大量诱导多倍体植株提供技术支持。本发明的方法诱导率高，变异植株成活率高，该技术瓶苗培养周期短、扩繁系数高、栽培适应性强。

主权项

一种多倍体金线莲有机培养一次性成苗诱导方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：（1）无菌体系的建立用金线莲茎段作为外植体，将采集的野生金线莲植株经消毒处理，接种到诱导培养基上建立无菌体系，诱导培养基为White+1.0mg•L‑16‑BA+0.3mg•L‑1NAA+0.5mg•L‑1KT+6.5g•L‑1琼脂+30g•L‑1蔗糖+2.0g•L‑1活性炭，pH5.6‑5.7，培养条件:温度23±2℃，光照强度500‑1000lx，光照时间10h/d；（2）多倍体诱导选取健壮、生长一致的经过4‑5个月培养的金线莲组培瓶苗为试验材料，切取诱导的无菌离体茎段，采用秋水仙素溶液浸泡法、涂抹法或加入培养基法进行处理，然后接种于多倍体一次性成苗培养基中培养；培养条件：培养室温度为23±2℃，先暗培养10天，10天后光照逐渐增强，光照时间10h/d，30天后光照强度控制在1500‑2000lx，光照时间12h/d；多倍体一次性成苗培养基：White+蛋白胨2g/L+花宝2号1g/L +土豆100g/L+蔗糖3%+琼脂0.65%+活性炭0.2%；（3）增殖培养：将步骤（2）得到的生长良好的多倍体金线莲植株瓶苗剪取切成1‑2cm带节茎段，接种在多倍体一次性成苗培养基中增殖培养；（4）移栽：将经过4‑5个月增殖培养的多倍体金线莲植株瓶苗，置自然光下炼苗5‑7天，打开瓶盖炼苗1‑2 天；然后用摄子从培养瓶中取出栽培瓶苗，洗去附着在根系上的培养基，移入混合基质中，放置在温度15 ～30℃、湿度75％～85％、避免阳光直射环境下种植，获得多倍体金线莲植株健壮完整种苗；步骤（2）所述秋水仙素溶液浸泡法的具体步骤为：选取健壮、生长一致的经过4‑5个月培养的金线莲组培瓶苗，在无菌条件下，将瓶苗切成1‑2cm带节茎段，放入经过高压灭菌的浓度为300‑500mg/L的秋水仙素溶液中浸泡24‑60h，然后将浸泡处理后的材料在超净工作台上用无菌水冲3‑4遍，接种于多倍体一次性成苗培养基中培养；步骤（2）所述涂抹法的具体步骤为：选取健壮、生长一致的经过4‑5个月培养的金线莲组培瓶苗，在无菌条件下，将瓶苗切成1‑2cm带节茎段，在超净工作台中用无菌棉签蘸上经过高压灭菌的300‑700mg/L秋水仙素溶液，然后用蘸上秋水仙素溶液的棉签涂抹在茎节处，再将涂抹过秋水仙素的材料接种到多倍体一次性成苗培养基中培养；步骤（2）所述加入培养基法的具体步骤为：选取健壮、生长一致的经过4‑5个月培养的金线莲组培瓶苗，在无菌条件下，将瓶苗切成1‑2cm带节茎段，接种到添加有300‑700mg/L秋水仙素的多倍体一次性成苗培养基上，培养15‑30天，然后转入多倍体一次性成苗培养基中继续培养。