[发明专利]一种可可丛枝病菌漆酶及其工程菌、重组漆酶和应用

摘要

本发明公开一种可可丛枝病菌漆酶及其工程菌、重组漆酶和应用。该可可丛枝病菌漆酶的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示。编码上述漆酶的DNA序列如SEQ ID NO:2所示。该DNA序列在构建巴斯德毕赤酵母表达系统中应用。重组毕赤酵母工程菌是将表达载体pPICZαA‑6AA‑LacMP线性化后转化毕赤酵母获得。重组漆酶是将重组毕赤酵母工程菌进行发酵获得。该重组漆酶具有漆酶活性并对中性或碱性环境和卤素有较高的耐受性；实现了该漆酶在生物酶法合成阿魏酸多聚物中的应用。

主权项

1.一种重组漆酶在阿魏酸多聚物合成反应中的应用，其特征在于：所述的重组漆酶的制备方法包括如下步骤：(1)将SEQ ID NO:2所示的DNA连入到巴斯德毕赤酵母表达载体pPICZαA，得到重组载体pPICZαA‑LacMP，将编码6个氨基酸ETEAEF的核苷酸序列连入到重组载体pPICZαA‑LacMP，得到表达载体pPICZαA‑6AA‑LacMP；(2)通过将表达载体pPICZαA‑6AA‑LacMP化学转化E.coli Top10得到克隆菌株E.coli Top10/pPICZαA‑6AA‑LacMP；(3)将步骤(2)所述表达载体pPICZαA‑6AA‑LacMP线性化后转化毕赤酵母(Pichia pastoris)获得重组毕赤酵母工程菌；(4)将所述重组毕赤酵母工程菌进行发酵获得重组漆酶。