[发明专利]用于镰刀菌产孢细胞及其分生孢子产生方式的显微分析方法

摘要

本发明具体涉及一种用于镰刀菌产孢结构的显微分析方法，包括以下步骤分生孢子获得、分生孢子悬浮液的制备、制备SNA观察平板、接种培养、制备观察玻片、显微观察等。本发明显微观察方法可以直接观察到产孢细胞形态典型特征及其分生孢子的产生方式，可以根据需要，设定不同时间分析点，随时切取培养菌块，直接进行显微观察分析，一次接种，多次观察，可拍摄高质量的产孢细胞及其分生孢子产生方式图片。

主权项

一种用于镰刀菌产孢细胞及其分生孢子产生方式的显微分析方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）分生孢子获得：取‑80℃或4℃条件下保存的镰刀菌菌株，接种于PDA平板培养基上，25℃条件下培养7～10d；（2）分生孢子悬浮液的制备：① 向接种培养了7～10d的PDA平板培养基中加入15～25mL无菌水，用无菌涂布器轻轻涂布菌落表面，使分生孢子充分释放于水中，获得分生孢子悬浮液；② 取2～4层无菌擦镜纸过滤步骤①中所得分生孢子悬浮液，去除菌丝或菌块，镜检其浓度后，调配成浓度为1×105个/mL的分生孢子悬浮液；（3）制备SNA观察平板：将制备好的、50～55℃的SNA培养基轻轻倒入一次性无菌培养皿中，制备厚度为1～1.2mm的SNA观察平板，待观察平板凝固后备用；（4）接种培养：取10µL浓度为1×105个/mL的分生孢子悬浮液与150 µL无菌水均匀混合后，均匀涂布于步骤（3）制备的SNA观察平板上，盖上培养皿盖并封口保湿，于25℃培养24～48h备用；（5）制备观察玻片：根据镰刀菌产孢细胞及其分生孢子产生发育进程，设定不同时间分析点，用无菌切割刀切取厚度为1～1.2mm，大小为5～12mm×5～12mm的SNA观察培养菌块，倒扣于大小为40mm×18 mm的盖玻片上，轻轻挤压，赶出盖玻片与培养物之间的气泡；（6）显微观察：采用倒置显微镜观察镰刀菌在个体发育进程中不同时期的产孢细胞形态特征及其分生孢子的产生方式。