[发明专利]金枪鱼暗色肉蛋白抗宫颈癌多肽的制备方法

摘要

本发明公开了一种金枪鱼暗色肉蛋白抗宫颈癌多肽的制备方法，制备时以金枪鱼暗色肉作为原料，经过脱脂、碱性蛋白酶酶解、超滤、凝胶过滤层析、细胞膜色谱纯化和反相高效液相纯化，得抗宫颈癌多肽Gln‑Tyr‑Asp‑Glu‑Tyr‑Trp。该多肽对人宫颈癌细胞株HeLa细胞的增值具有显著抑制作用，IC50为0.16 mg/mL，可用于制备防治宫颈癌的药物。

主权项

金枪鱼暗色肉蛋白抗宫颈癌多肽的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）金枪鱼暗色肉的预处理：金枪鱼暗色肉匀浆，加热至95～100℃后保温10～15min，然后降至室温，按照料液比1g:4～5mL加入异丙醇，室温下脱脂22～24 h，然后于4℃、10000 rpm离心15～20 min除去异丙醇，收集脱脂金枪鱼暗色肉固形物，即为脱脂金枪鱼暗色肉蛋白；2）脱脂金枪鱼暗色肉蛋白的酶解：以脱脂金枪鱼暗色肉蛋白作为原料，按固液比1 g : 20～25 mL加入Gly‑NaOH缓冲液，得混合液；将所述的混合液温度升至45～55 ℃预热5～10 min，按照脱脂金枪鱼暗色肉质量的1.5～2.5%加入蛋白酶，酶解温度为45～55 ℃，酶解4～5 h后，将溶液升温至90～95℃，并于此温度保持10～15 min后，10000g离心20～25 min，取上清液，即为酶解产物；3）金枪鱼暗色肉蛋白抗宫颈癌多肽的制备：将制备的酶解产物采用3 kDa超滤膜进行超滤处理，收集分子量小于3 kDa部分，得超滤酶解液，再将酶解液依次经凝胶过滤层析、细胞膜色谱和反相高效液相色谱（RP‑HPLC）纯化，得到抗宫颈癌多肽。