[发明专利]一种头孢菌素C酰化酶的制备方法

摘要

本发明属于生物化学领域，提出一种头孢菌素C酰化酶的制备方法，包括步骤：1)平板培养：将头孢菌素C酰化酶生产菌种大肠杆菌基因工程菌CPCA2013涂布于LB琼脂平板培养基培养；2)种子培养：从LB平板培养基上挑取单菌落接入种子培养基，进行种子培养；3)发酵培养：种子培养后的种子液按发酵培养基体积的3％‑4％的接种量接入到发酵培养基中进行培养。本发明生产的头孢菌素C酰化酶，发酵液酶活为5000U/L左右，经成本核算后可以进行大规模工业化生产。本发明生产的头孢菌素C酰化酶，发酵液酶活比现有技术生产的发酵液酶活高出0.8倍，而且酶解效果佳，酶活力稳定性高。

主权项

1.一种头孢菌素C酰化酶的制备方法，其特征在于，包括步骤：1)平板培养：将头孢菌素C酰化酶生产菌种大肠杆菌基因工程菌涂布于LB琼脂平板培养基培养；制备头孢菌素C酰化酶的菌种为大肠杆菌基因工程菌CPCA2013,保藏编号为CGMCC No.9285；2)种子培养：从LB平板培养基上挑取单菌落接入种子培养基，进行种子培养，种子培养基的组成为：蛋白胨15‑17g/L，甘油2‑4g/L，酵母浸粉9‑12g/L，氯化钠4‑6g/L，40‑60ppm卡那霉素，氢氧化钠调至pH7.0,用自来水配制；3)发酵培养：种子培养后的种子液按发酵培养基体积的3％‑4％的接种量接入到发酵培养基中进行培养，发酵培养初始的培养基组成为：磷酸氢二钾5‑7g/L，一水合柠檬酸3‑5g/L，一水合氯化钙0.03‑0.05g/L，七水合硫酸镁1‑3g/L，氯化锌0.003‑0.005g/L，二水合氯化铜0.003‑0.005g/L，硼酸0.005‑0.007g/L，四水合氯化锰0.002‑0.004g/L，六水合氯化钴0.003‑0.005g/L，七水合硫酸亚铁0.05‑0.07g/L，葡萄糖4‑6g/L，40‑60ppm卡那霉素，氨水调至pH7.0，用自来水配制；当残葡萄糖浓度低于0.1g/L时开始补糖，流加葡萄糖的质量浓度为50‑60％，流加起始补糖速度为3‑4g/L每小时，最大补糖速度为5‑6g/L每小时，补糖开始后3‑4小时达到最大补糖速度，维持葡萄糖浓度低于0.1g/L。