[发明专利]用于原位检测核酸的超灵敏方法

摘要

本文公开了基于方法和常规ISH信号放大方法的组合的用于原位检测一种或多种目标核酸的方法。这种新方法产生了高信号强度并同时保持了信号放大的低背景噪声。可以一致地重复产生结果并且所述方法能够容易地用于常规临床诊断使用。此外，本发明涉及用于一种或多种目标核酸的灵敏检测的试剂盒，其包含测定和通用ISH信号放大测定的组分。

主权项

检测至少一种目标核酸的方法，所述方法包括：(a)提供包含或怀疑包含所述目标核酸的样品；(b)提供能够杂交至所述目标核酸的至少一组两个或更多个捕获探针；(c)提供：(i)能够杂交至标记探针的扩增子；(ii)能够杂交至所述扩增子并且能够杂交至所述两个或更多个捕获探针的组的预扩增子，其中所述预扩增子:扩增子之比为1:1‑16之间、1:2‑10之间或1:2‑5之间；(iii)标记探针，其中所述标记探针结合至辣根过氧化物酶(HRP)分子；以及(iv)多个酪胺‑荧光团分子，或酪胺‑生物素或酪胺‑半抗原分子以及能够检测所述酪胺‑生物素或酪胺‑半抗原分子的检测标记物，其中所述酪胺能够与所述HRP分子反应；(d)将所述两个或更多个捕获探针的组杂交至所述目标核酸；(e)将所述预扩增子、扩增子和标记探针捕获至所述两个或更多个捕获探针的组，从而将所述标记探针捕获至所述目标核酸；以及(f)检测所述荧光团的存在、不存在或量或者与所述被捕获的标记探针有关的检测标记物。