[发明专利]一种鸡胚病毒液病毒效价的测定方法

摘要

本发明公开了一种鸡胚病毒液病毒效价的测定方法，其包括以下步骤鸡胚接种部位的确定、样品的稀释、接种、封孔、鸡胚后孵化及鸡胚的收获冷蛋、鸡胚红细胞凝集价的测定及EID50的计算。本发明改变鸡胚的接种部位，使接入尿囊腔的病毒液的量更加精确，降低测定结果的误差，封孔时使用速凝胶水替代传统以腊封孔的方法，封孔速度快又安全，收获冷蛋过程，选择采取不同温度逐渐过渡的方法，避免由于温差大造成鸡胚挣扎将卵黄破裂，从而提高病毒效价测定结果的准确性。

主权项

一种鸡胚病毒液病毒效价的测定方法，其特征在于：其包括以下步骤：1) 鸡胚接种部位的确定：选择鸡胚侧，鸡胚脐带周围，避开大血管的部位，画直径2‑3mm的圆圈作为接种部位；2) 样品的稀释：取新城疫鸡胚病毒液，用生理盐水逐步稀释，得到不同稀释度的新城疫鸡胚病毒液稀释液；3) 接种：用注射器吸取10‑7、10‑8、10‑9三个稀释度的新城疫新城疫鸡胚病毒液稀释液，每个稀释度接种5枚10日龄鸡胚，每胚0.1ml；4) 封孔：用速凝胶水将上述接种后的鸡胚的接种部位封住；5) 鸡胚后孵化及鸡胚的收获冷蛋：将接种封孔后的鸡胚置36‑37℃的恒温恒湿培养箱中培养，每24h照蛋1‑2次，48h以前死亡的鸡胚弃去不计，在48‑120h死亡的鸡胚随时取出，直立蛋盘，置2‑8℃冷却120h，将所有的活胚收取置20℃的温箱中1h，然后再移至15℃的温箱中1h，然后再将活胚移至2‑8℃的冷库中冷却4‑24h，等待测红细胞凝集价；6）鸡胚红细胞凝集价的测定及EID50的计算：同一稀释度死亡的鸡胚等量收集胚液于同一试管中，活鸡胚单个收集胚液，分别测红细胞凝集价，胚液凝集价≥1:160者判为感染，计算病毒效价EID50。