[发明专利]一种血液及尿液中硫化氢的测定方法

摘要

本发明公开了一种分散固相微萃取结合高效液相色谱测定血液及尿液中的硫化氢的方法，利用血清和尿液中游离H₂S、HS^‑、S^2‑与对氨基二甲基苯胺盐酸盐和三氯化铁在酸性条件下衍生形成亚甲基蓝，通过加入改性磁性纳米材料对亚甲基蓝进行吸附，在外加磁场的作用下将磁性材料与基体分离，除去血液、尿液中大分子物质对测定的干扰。用少量洗脱剂对磁性材料进行洗脱，洗脱液用高效液相色谱进行定量测定，检测限可达0.005μg/mL；方法具有准确度、灵敏度高、简单快速等特点。

主权项

一种血液及尿液中硫化氢的测定方法，其特征在于：以制备的硅酸纳改性的磁性纳米材料为固相萃取剂，按每5mL尿液或处理过的血液中加入0.2%对氨基二甲基苯胺盐酸盐溶液100～200μL，再加入质量体积比浓度20%的三氯化铁水溶液50～100μL，混合均匀，静置5～10min；然后加入5mol/L NaOH溶液调节pH至中性，3000r/min离心2～5min，吸取上清液；向上清液中加入1～3mg固相萃取剂，涡旋1～2min使固相萃取剂均匀分散在水中，然后静置5～10min后，用外磁场收集带有目标物的固相萃取剂，去掉上清液，用洗脱剂洗脱固相萃取剂，收集洗脱液，采用高效液相色谱仪进行含量测定；所述硅酸钠改性的磁性纳米材料的制备包括以下步骤：①Fe₃O₄磁性纳米材料的制备：按照三价铁盐与二价铁盐摩尔比为2.0～1.6:1的比例将三价铁盐溶液与二价铁盐溶液溶解于5～10倍的三价铁盐与二价铁盐溶液体积的去离子水中，在氮气保护下，滴加氨水使溶液体系pH为9～12，在60～80℃、搅拌速度400～800 rpm下，水浴加热，恒温搅拌反应1～3h后，用去离子水洗涤至中性，40～80℃真空干燥6～12h，制得四氧化三铁磁性纳米材料；②Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米材料的制备：按1.0g Fe₃O₄磁性纳米材料添加100 mL去离子水的比例将步骤①制备好的Fe₃O₄磁性纳米材料分散在去离子水中，并在氮气保护下，滴加1.0 mol/L硅酸钠10 mL至Fe₃O₄纳米分散液中，使体系pH为6～7，在70～85℃、搅拌速度400～800rpm下，恒温搅拌反应2～4h后，用去离子水洗涤4次，40～80℃真空干燥6～12h，制得Fe₃O₄@SiO₂磁性纳米材料；所述的高效液相色谱测定的色谱条件为：固定相为C18的分析色谱柱，洗脱液为体积比50︰50的甲醇和水的混合液，洗脱方式为等度洗脱；流速为1.0mL/min；进样量为10μL，柱温25℃；紫外‑可见光二极管阵列检测器的检测波长为665nm；所述的洗脱剂为甲醇、乙腈、丙酮中的一种。