[发明专利]一种浙江金线兰种子组织培养与快速育苗方法

摘要

本发明涉及一种浙江金线兰种子组织培养与快速育苗方法，属于植物组织培养快速繁殖技术领域。一种浙江金线兰种子组织培养与快速育苗方法，包括以下依序进行的步骤(1)果实的选择；(2)无菌播种与萌发培养；(3)无菌实生苗的健壮培养；(4)丛生芽增殖培养；(5)壮苗生根培养；(6)炼苗移栽。本发明所提供的方法操作简便，能获得大量的性状优良的植株，可供遗传利用及产业化生产，其投入少，成苗速度快，种苗壮，生产周期短，仅6‑7个月，不仅能够有效地保护野生浙江金线兰资源，同时还能够满足工业化生产种苗需要的连续性生产流程。

主权项

一种浙江金线兰种子组织培养与快速育苗方法，其特征在于：所述的方法包括以下依序进行的步骤：(1)果实的选择：于浙江金线兰开花期，选择优良的浙江金线兰株系进行人工同株或异株授粉，授粉70‑80天后,选择发育基本成熟、且外表颜色接近黄色或黄褐色的果实用于组织培养；或者野外采集的野生浙江金线兰植株上的蒴果，选择果实外表颜色近黄色或黄褐色、且未开裂者用于组织培养；(2)无菌播种与萌发培养：将步骤(1)中选取的果实用质量百分比浓度为70‑85％的酒精浸泡30‑45秒后，置于质量百分比浓度为0.08‑0.15％升汞溶液中消毒8‑15分钟，用无菌水冲洗干净后，切开果实，取出白色粉状或浆状种胚接种到种子萌发培养基上，所述种子萌发培养基由以下组分按照以下配比组成：MS或N6基本培养基+80‑200g/L土豆泥+50‑200ml/L椰子水+20‑30g/L白糖或蔗糖+5.0‑8.0g/L琼脂或卡拉胶，pH值为5.4‑5.8；接种后的培养瓶置于温度20‑28℃、无光照条件下培养诱导种胚萌发；(3)无菌实生苗的健壮培养：将步骤(2)获得的带叶和茎的小芽或者具有叶、茎及胚根的无菌苗转入光照条件下进行10‑20天的健壮培养，培养条件为光照度2000‑2500lx，光照8‑10小时/天，培养温度22±2℃；(4)丛生芽增殖培养：在无菌条件下，先将步骤(3)中获得的健壮的实生苗切割成带至少一个茎节的茎段或顶芽，插入增殖培养基中诱导培养生成丛生芽；再将诱导培养生成的丛生芽分切成带至少一个茎节的顶芽或茎段，插入新的增殖培养基中进行至少一次继代增殖培养，每次继代增殖的培养周期为70‑90天，每次继代增殖获得的丛生芽用于下一步骤的壮苗生根培养或者用于下一周期的继代增殖培养；整个培养过程中，培养温度为22±2℃，光照度为1300‑2500lx，光照8‑10小时/天；所述增殖培养基由以下组分按照以下配比组成：MS或N6基本培养基+1.0‑2.5mg/L 6‑BA+0.2‑0.5mg/L NAA+1‑2g/L LH(水解乳蛋白)+20‑30g/L白糖或蔗糖+6‑7g/L琼脂或卡拉胶，pH值为5.2‑5.6；(5)壮苗生根培养：将步骤(4)中获得的丛生芽切割成单株，接种到壮苗生根培养基上进行80‑100天的壮苗生根培养，培养温度22±2℃，光照度2000‑2500lx，光照8‑10小时/天；所述壮苗生根培养基由以下组分按照以下配比组成：MS+1.0‑2.0mg/L NAA+100‑280g/L香蕉+0‑80g/L马铃薯+1.0‑3.0g/L活性炭+15‑20g/L白糖或蔗糖+6‑8g/L琼脂或卡拉胶，pH值为5.2‑5.6；(6)炼苗移栽：将完成步骤(5)的壮苗生根培养获得的高度大于3cm且具有2条以上根的无菌大苗接着进行炼苗移栽。