[发明专利]同时检测肉及肉制品中牛猪源性成分的Taqman-LNA多重荧光定量PCR方法及引物探针以及试剂盒

摘要

本发明公开一种同时检测肉或肉制品中牛、猪源性成分的Taqman‑LNA多重荧光定量PCR的方法。本发明利用序列相对较短但Tm较高的LNA探针序列，可在确保特异性的前提下，有效提高体系的稳定性，建立了一套多重荧光定量PCR检测体系，该体系能够同时检测牛、猪源性成分，可检测肉或肉制品中DNA含量低至0.05ng的牛源性成分和0.05ng的猪源性成分，相当于可检测含量约0.005%的对应动物成分。本发明的方法具有通量高、特异性强、灵敏度高、应用性好等优点，能较好应用于肉及肉制品中牛、猪源性成分的检测。

主权项

同时检测肉或肉制品中牛、猪源性成分的Taqman‑LNA多重荧光定量PCR的引物探针组，包括牛源性成分特异性引物和探针，猪源性成分特异性引物和探针，其中引物和探针以及序列为：牛源性成分的上游引物N‑F 5'‑ttgaattaggccatgaagca‑3'；牛源性成分的下游引物N‑R 5'‑cgacttgtctcctctcatgtagc‑3'；牛源性成分的探针T1 5’‑ FAM‑cgcccgtcaCcctcctcaaata‑BHQ1‑3'；猪源性成分的上游引物Z‑F 5’‑aaccccgatagaccttaccaa‑3'；猪源性成分的下游引物Z‑R 5‘‑tcctttttagggtttgctgaag‑3'；猪源性成分的探针T2 5‘‑ Rox‑tgccaattcagcctatataCCgcca‑BHQ2‑3'；其中探针中的“C ”为LNA修饰碱基，FAM和ROX为荧光基团，BHQ1和BHQ2为猝灭基团。