[发明专利]一种基于合成单链DNA文库进化酶的方法在审
| 申请号： | 201510213131.2 | 申请日： | 2015-04-29 |
| 公开（公告）号： | CN104877977A | 公开（公告）日： | 2015-09-02 |
| 发明（设计）人： | 康振;陈坚;金鹏;堵国成;张琳培 | 申请（专利权）人： | 江南大学 |
| 主分类号： | C12N9/24 | 分类号： | C12N9/24;C40B50/06 |
| 代理公司： | 北京爱普纳杰专利代理事务所(特殊普通合伙) 11419 | 代理人： | 张勇 |
| 地址： | 214122 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于合成单链DNA文库进化酶的方法，属于基因工程技术领域。本发明基于PCR技术，先得到单链突变体，再以此为模板获得多样性丰富的双链突变体文库。突变文库重组表达载体后转化宿主进行高通量筛选进化突变株。本发明采用此技术，成功对酶基因进行体外改造，获得了性质非常优异的突变株。本方法实现了基因的快速体外进化，操作简单，特别适合于对基因内部引入丰富的突变多样性，进行快速定向进化。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 基于 合成 dna 文库 进化 方法 | ||
【主权项】：
一种高效进化酶的方法，其特征在于，主要包括制备单链突变体文库、制备双链突变体文库、筛选突变体，单链突变体文库与双链突变体文库分步或同时构建；为构建单链突变体文库，针对亲本基因的各个目标突变区域分别设计引物，各引物方向相同，并通过向PCR体系中添加DNA连接酶来连接各发生突变的核苷酸片段，得到完整的单链突变体；为构建双链突变体文库，单链突变体的两端需带上额外的锚点序列，便于在双链化时，设计用于特异性扩增单链突变体的引物。
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