[发明专利]一种嗜碱性粒细胞致敏状态的鉴定方法

摘要

本发明提供一种嗜碱性粒细胞致敏的鉴定方法，包括如下步骤首先按顺序将试验样本编号，并标记好试验所需的流式上样管；在每个流式上样管内加入所需的抗人CD123、抗人CCR3、抗人HLA‑DR、抗人FcεRI荧光标记流式抗体组合；将混合好的全血加到标记好的流式管内，室温避光孵育；每个样本管内加入红细胞裂解液，室温避光孵育；孵育结束后，离心去上清；用流式细胞仪检测并分析嗜碱性粒细胞的计数及平均荧光强度。本发明方法在无需分离纯化嗜碱性粒细胞的情况下即能将外周血98‑100％的嗜碱性粒细胞与其他种类细胞分辨出来，并能鉴定出嗜碱性粒细胞致敏状态，每例待测样本需要不超过100μL的全血，重复性好。

主权项

一种嗜碱性粒细胞致敏的鉴定方法，其特征在于：包括如下步骤：①首先按照9:1的比例，用9倍的超纯水将试剂盒中的浓缩的红细胞裂解液储存液稀释到工作状态；同样地用9倍的超纯水将试剂盒中的浓缩的磷酸盐缓冲液的储存液稀释到工作状态；②按顺序将试验样本编号，并标记好试验所需的流式上样管；③在每个流式上样管内加入所需的抗体组合：FITC标记的抗人CD123、APC标记的抗人CCR3、APC/Cy7标记的抗人HLA‑DR，PE标记的抗人FcεRI，用量为每人份四种抗体各5μL，以鉴定嗜碱性粒细胞的致敏状态；④患者全血低速漩涡混匀后，用加样枪吸取混合好的25μL至125μL全血加到标记好的流式上样管内，漩涡振荡器上低速漩涡混匀3～5s，室温避光孵育15min；⑤孵育结束后，每个流式上样管内加入1mL的红细胞裂解液，漩涡振荡器上低速漩涡混匀3～5s，室温避光孵育10min；⑥孵育结束后，1200rpm转速离心6min，离心结束后，弃去上清液，加入1mL的PBS缓冲液，以同样的速度离心，离心结束取样操作时，应避免剧烈晃动引起细胞沉淀悬浮；⑦离心后，以同样的方式去上清液，加入300μL的PBS缓冲液，用流式细胞仪检测；⑧用不同流式细胞仪相应的分析软件分析嗜碱性粒细胞的计数及平均荧光强度。