[发明专利]一种模型拟合和基因改造提高蛋白表达效率的方法及应用

摘要

本发明涉及一种模型拟合和基因改造提高蛋白表达效率的方法及应用，本发明采用M‑fold软件对目的蛋白核糖体蛋白L11的mRNA序列的二级结构进行拟合，输入起始密码子前约二十位和起始密码子后约五十位核苷酸序列进行拟合。根据拟合的二级结构，移除在起始密码子后的发夹结构，对发夹结构内的鸟嘌呤、胞嘧啶等进行针对性的突变，降低它们的含量，以腺嘌呤、胸腺嘧啶取代。进行定点突变后，用实验筛选目的蛋白提高了产量的突变体，并且以生物功能实验进一步验证突变体的生物功能，发现用该方法突变的突变体在增加核糖体蛋白L11表达的同时，对其生物学功能没有显著影响。这种基于模型拟合、定点突变和实验筛选来改善重组核糖体蛋白表达效率的方法，有较高的通用性和可行性，将同样适用于其他重组蛋白的大量表达和工业生产等。

主权项

一种模型拟合和基因改造获得的表达效率提高的L11蛋白，其特征在于，所述蛋白的核苷酸序列分别为：L11‑YYY序列和L11‑LLI序列，所述L11‑YYY序列为：AGTCCTCTRATATTTTGTTTACTTTAAGAAGGAGATATACCTATTATTATCATCATCATCATCATCACAGCAGCGGCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCATATGGCTAAGAAAGTACAAGCCTATGTCAAGCTGCAGGTTGCAGCTGGTATGGCTAACCCGAGTCCGCCAGTAGGTCCGGCTCTGGGTCAGCAGGGCGTAAACATCATGGAATTCTCCAAAGCGTTCAACGCAAAAACTGATTCCATCGAAAAAGGTCTGCCGATTCCGGTAGTAATCACCGTTTACGCTGACCGTTCTTTCACTTTCGTTACCAAGACTCCGCCGGCAGCAGTTCTGCTGAAAAAAGCGGCTGGTATCAAGTGTGGTTCCGGTAAGCCGAACAAAGACAAAGCGGGTAAAATTTCCCGCGCTCAGCTGCAGGAAATCGCGCAGACCAAAGCTGCCGACATGACTGGTGCCGACATTGAAGCGATGACTCGCTCCATCGAAGGTACTGCACGTTCCATGGGCCTGGTAGTGGAGGACTAATGGATCCGGCTGCTAACAAAGCCCGAAAGGAAGCTGAGTTGGCTGCTGCCACCGCTGAGCAATAACTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTGCTGAAAGGAGGAACTATATCCGGATATCCACAGGACGGGTGTGGTCGCCATGATCGCGTAGTCGATAGTGGCTCCAAGTAGCGAAGCGAGCAGGACTGGGCGGCGGCCAAAGCGGTCGGACAGTGCTCCGAGAACGGGTGCGCATAGAAATTGCATC，所述L11‑LLI序列为：AGTCCTCTRATATTTTGTTTACTTTAAGAAGGAGATATACCTTATTAATTCATCATCATCATCATCACAGCAGCGGCCTGGTGCCGCGCGGCAGCCATATGGCTAAGAAAGTACAAGCCTATGTCAAGCTGCAGGTTGCAGCTGGTATGGCTAACCCGAGTCCGCCAGTAGGTCCGGCTCTGGGTCAGCAGGGCGTAAACATCATGGAATTCTCCAAAGCGTTCAACGCAAAAACTGATTCCATCGAAAAAGGTCTGCCGATTCCGGTAGTAATCACCGTTTACGCTGACCGTTCTTTCACTTTCGTTACCAAGACTCCGCCGGCAGCAGTTCTGCTGAAAAAAGCGGCTGGTATCAAGTGTGGTTCCGGTAAGCCGAACAAAGACAAAGCGGGTAAAATTTCCCGCGCTCAGCTGCAGGAAATCGCGCAGACCAAAGCTGCCGACATGACTGGTGCCGACATTGAAGCGATGACTCGCTCCATCGAAGGTACTGCACGTTCCATGGGCCTGGTAGTGGAGGACTAATGGATCCGGCTGCTAACAAAGCCCGAAAGGAAGCTGAGTTGGCTGCTGCCACCGCTGAGCAATAACTAGCATAACCCCTTGGGGCCTCTAAACGGGTCTTGAGGGGTTTTTTGCTGAAAGGAGGAACTATATCCGGATATCCACAGGACGGGTGTGGTCGCCATGATCGCGTAGTCGATAGTGGCTCCAAGTAGCGAAGCGAGCAGGACTGGGCGGCGGCCAAAGCGGTCGGACAGTGCTCCGAGAACGGGTGCGCATAGAAATTGCATC。