[发明专利]葡萄枝条RNA的提取方法

摘要

本发明公开了葡萄枝条RNA的提取方法，包括以下步骤：称取样品加入聚乙烯吡咯烷酮以液氮研磨，加入CTAB提取液和β-巯基乙醇，金属浴后混匀；混匀后放在冰上加入醋酸钾溶液和2-丁氧乙醇，混匀静置；再加入CHCl₃离心；离心液取上清加入CHCl₃，再次离心；离心液取上清，加入预冷的异丙醇，冰浴条件下放置30min；离心后弃上清，沉淀用预冷75%乙醇漂洗一次；离心后弃上清，将离心管风干；再加DEPC-H₂O溶解即可。本发明的有益效果为：本发明提供的葡萄枝条RNA的提取方法，获得了高质量的RNA，可以满足葡萄SSH分析、转录组测序、生物信息学分析等对RNA质量的要求。

主权项

葡萄枝条RNA的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1）称取0.2g葡萄韧皮部与形成层混合样置入研钵中，加入聚乙烯吡咯烷酮固体粉末0.02 g后，迅速倒入液氮进行充分研磨，然后将粉末转入2 ml离心管中，加入预热至65℃的2 % CTAB提取液700 μl和20℃的β‑巯基乙醇20μl，颠倒混匀后，在65℃金属浴30min，每隔5 min取出涡旋混匀1次；2）取出步骤1）得到的涡旋混匀后的离心管放在冰上，迅速加入5M 醋酸钾溶液300μl和2‑丁氧乙醇300μl，涡旋振荡，混匀后在‑20 ℃条件下静置30min；3）在步骤2）得到的静置后离心管中，加入200 μl CHCl₃，4℃、15000rpm离心10 min；4）将步骤3）得到的离心液，取上清，加入800 μl CHCl₃，4℃、12000rpm 离心10 min；5）将步骤4）得到的离心液，取上清，并加入吸取的上清液体积1.5 倍的‑20℃预冷的异丙醇，在冰浴条件下放置30 min；6）将步骤5）中得到的冰浴后的混合液，在4℃、12000 rpm 离心10 min，弃上清，沉淀用‑20℃预冷的75 %乙醇漂洗一次；7）将步骤6）得到的漂洗后溶液，在4℃、5000 rpm离心3 min，弃上清，在超净工作台上，将离心管倒置在无菌滤纸上吸干管壁内液体后，在超净台上风干2min；8）在步骤7）得到的风干后离心管中，加DEPC‑H₂O 50 μl溶解，‑80℃保存备用。