[发明专利]基因打靶方法

摘要

本发明提供一种新型的两步基因打靶方法以及用于基因打靶的核苷酸构建物，所述方法能提高基因打靶效率和精确鉴定靶基因敲除株。本发明方法包括首先通过同源重组用打靶盒高效替换基因组中的靶基因，所述打靶盒由靶基因活性变异体、标记基因和位点特异性重组位点构成。然后通过重组酶切除打靶盒，在靶基因上留下一个位点特异性重组位点而产生靶基因敲除株。本发明还包括利用重组酶表达载体中的反选择标记除去敲除株中的重组酶表达载体。本发明方法可以利用所有机体细胞中内源性的同源重组过程，因此，可以用于改造机体的任何基因。

主权项

一种用于基因打靶的核苷酸构建物，其结构如下式所示：5’‑A₁‑B₁‑C₁‑X‑C₂‑B₂‑A₂‑3’5’‑A₁‑B₁‑C₁‑C₂‑X‑B₂‑A₂‑3’或5’‑A₁‑B₁‑X‑C₁‑C₂‑B₂‑A₂‑3’其中，A₁、A₂是同源序列；B₁、B₂是位点特异性重组位点；C₁、C₂是标记基因且不同时为空；X是靶基因活性变异体；所述靶基因活性变异体具有该靶基因的功能活性。