[发明专利]一种抗链球菌溶血素“O”检测方法

摘要

本发明提供一种抗链球菌溶血素“O”(ASO)检测方法，所述检测方法原理基于胶乳增强免疫比浊法，其特点在于应用化学方法交联，通过水溶性碳化二亚胺(EDC)与N‑羟基琥珀酰亚胺(NHS)使溶血素“O”与羧化聚苯乙烯胶乳共价交联，形成抗链球菌溶血素“O”胶乳颗粒(简称ASO胶乳颗粒)，同待测样品混合后在37℃恒温，波长为540nm下，测定吸光度，计算出样品中ASO抗体含量。本检测方法灵敏度高，特异性强，试剂配制简单，值得进一步推广使用。

主权项

一种抗链球菌溶血素“O”检测方法，其特征在于：所述检测方法原理基于胶乳增强免疫比浊法，其检测方法是将抗链球菌溶血素“O”胶乳颗粒，同待测样品混合后在37℃恒温，波长为540nm下，测定吸光度，计算出样品中抗链球菌溶血素“O”抗体含量，抗链球菌溶血素“O”抗体的计算公式为：抗链球菌溶血素“O”抗体浓度=△AT/△AS×校准液浓度式中：△AT 以空白管吸光度为对照的样品管吸光度△AS 以空白管吸光度为对照的校准管吸光度；该抗链球菌溶血素“O”胶乳颗粒通过以下方法制备：（1）相关缓冲液的准备活化缓冲液：取800ml去离子水溶解9.76gN‑吗啉乙磺酸，0.1%NaOH调pH至6.1，用去离子水定容至1L，15psi湿热灭菌20min；标记缓冲液：取800ml去离子水溶解9.13g磷酸一氢钾和1.36g磷酸二氢钾，0.1%盐酸调pH至7.4，用去离子水定容至1L，15psi湿热灭菌20min；保存缓冲液：800ml去离子水溶解9.13g磷酸一氢钾，1.36g磷酸二氢钾，1.0g Tween 20，0.1%盐酸调pH至7.4，用去离子水定容至1L，15psi湿热灭菌20min；EDC活化缓冲液：取20mg EDC，溶于10ml活化缓冲液中，制成EDC活化缓冲液；NHS活化缓冲液：取40mg NHS，溶于10ml活化缓冲液中，制成NHS活化缓冲液；（2）抗链球菌溶血素“O”胶乳试剂的配制原料：羧化聚苯乙烯胶乳粒径为100‑150nm，浓度为10%，取1ml，溶于3‑7ml活化缓冲液中进行稀释，稀释好的微球溶液中加入1ml EDC活化缓冲液，1ml NHS活化缓冲液，20‑25℃震荡10min，37℃恒温水浴20min，2‑8℃、在12000rpm下离心30min，去除上清液，用标记缓冲液洗涤一次后，用标记缓冲液稀释至7ml，边搅拌边加入50mg抗链球菌溶血素“O”，用标记缓冲液补足至10ml，20‑25℃震荡3小时，37℃恒温水浴3小时，在12000rpm下离心30min，去除上清液，并用标记缓冲液洗涤两次，洗涤后用保存缓冲液配成1%重量体积比的悬液，以0.1%重量体积比叠氮钠溶液防腐。