[发明专利]一种采用2;4-二硝基氯苯复合乙酸法建立异常胆液质载体UC病证动物模型的方法

摘要

本发明公开了一种采用维吾尔医学体液论结合2,4‑二硝基氯苯复合乙酸法建立异常胆液质载体UC病证动物模型的构建方法，通过以雄性wistar品系大鼠为建模动物，给予建模大鼠干热属性饮水、干热属性饲料灌胃、干热环境和慢性刺激连续刺激这四种处理，以2%的2,4‑二硝基氯苯丙酮液滴背，然后给予建模大鼠禁食，经肛门插入大鼠结肠内灌入2,4‑二硝基氯苯乙醇溶液、乙酸溶液和生理盐水冲洗等一系列的处理从而建立异常胆液质载体UC病证大鼠模型，克服了没有相关动物模型对于异常胆液质载体UC病证机制的研究和相关药物开发的限制，且造模方法简单、成模率高、造模周期短、成本低以及重现性好的优势，具有广泛的应用价值。

主权项

一种采用2,4‑二硝基氯苯复合乙酸法建立异常胆液质载体UC病证动物模型的构建方法，其特征在于，具体构建方法步骤如下：(1)实验动物：选取健康清洁级，体重为180±30g的雄性wistar品系大鼠；(2)实验大鼠1‑13天的饲养：实验大鼠按照每笼5只，满足正常饲养密度，实验大鼠给予每日每笼实验大鼠300g普通饲料适应性喂养7天后给予每日每笼实验大鼠300g普通饲料，400ml干热属性饮水，并连续给予干热属性饲料灌胃、干热环境和慢性刺激连续刺激；所述的干热属性饮水,将每1g红花溶于400ml的双蒸水中，浸泡6h后再给予实验动物饮用；所述的干热属性灌胃饲料，分别将黑胡椒和干姜打成粉末；将每30g黑胡椒粉末、30g干姜粉末和0.3g红花溶于400ml的双蒸水制备为产生胆液质的灌胃饲料，每天每只大鼠灌胃2ml/100g，灌胃前一天配置,在4度的冰箱中保存；第二天灌胃前室温放置2h；所述的干热环境：采用人工气候箱进行饲养，其中喂养环境温度为26±2℃，相对湿度为36～40％，打开光照，每天10小时；所述的慢性刺激连续刺激，慢性刺激包括4种刺激：一是采用电刺激，采用间断足底电击作为应激源，在输出电压20～40V，不定时改变电压，间隔2～5min，每天1次，1次30min条件下产生慢性应激；二是采用夹尾刺激，用小型书夹夹住实验大鼠的尾巴,让其实验大鼠相互撕咬、打斗，若停止打斗，则用力拍鼠笼子予以刺激，让其重新打斗或奔跑，每日处理1次，每次5min；三是采用噪音刺激，每天用100dB的快节奏音乐持续播放2h；四是采用化学刺激，实验大鼠背部剃毛，用1mL注射器滴2％(2g/100mL)的2,4‑二硝基氯苯(DNCB)丙酮液0.25mL，滴在剃毛处，每天1次；(3)实验大鼠14‑23天的饲养：将上述步骤(2)处理后的大鼠从第14天禁食，以准备灌肠DNCB，于第15天用直径3mm的导管经肛门插入大鼠结肠内8cm灌入0.1％的2,4‑二硝基氯苯(DNCB)乙醇溶液0.25ml，第16天相同方法以体积分数为6％的乙酸溶液2ml灌肠，15s后立即注入5ml生理盐水冲洗，以消除乙酸的刺激作用，灌肠前24h禁食，自由饮水，观察7天，观察期前3天禁食，大鼠自由饮用7.5％葡萄糖水，以降低大鼠死亡率，葡萄糖水按照每30g葡萄糖粉与每400ml灭菌水配置；(4)通过上述各技术步骤即可建立了异常胆液质载体UC病证大鼠模型。