[发明专利]一种硅珠法结合离心套管提取DNA的方法

摘要

本发明公开了一种硅珠法结合离心套管提取DNA的方法，包括以下步骤：1)将检材置入离心套管的内套管内，将TES缓冲液、十二烷基肌氨酸钠、蛋白酶K混匀加入内套管内，置金属浴上裂解；2)离心机中离心，加入吸附液再次离心；3)去除内套管加入吸附液、硅珠悬浊液静置吸附；4)离心去除上清；5)离心吸去残液；6)加入冰乙醇离心去除上清；7)离心吸去残液；8)烘干硅珠，加入洗脱液孵化；9)加入PCR扩增液内扩增；本发明方法检出率高，最终模板保有量达50‑70％，特别适用于微量检材的检验，可检出模板含量在100pg以上的现场DNA检材。

主权项

1.一种硅珠法结合离心套管提取DNA的方法，其特征在于：所述方法适用于检验模板含量在100pg以上的现场DNA检材，所述方法的DNA模板保有量为50‑70％，所述方法包括以下步骤：(1)将检材置入离心套管的内套管内，将TES缓冲液、十二烷基肌氨酸钠、10mg/ml的蛋白酶K按体积比10:2～3:2～3混匀后，取160～200微升，加入离心套管的内套管内，置56℃金属浴上裂解20～30分钟，95～99℃裂解10～15分钟；(2)将离心套管放入离心机中13000～17000g离心0.5～1分钟，打开离心套管的管盖加入吸附液200～300微升，再次放入离心机13000～17000g离心2～5分钟；(3)打开离心套管管盖，去除内套管，加入吸附液700～1000微升，加入硅珠悬浊液10～16微升，静置吸附15～20分钟；(4)将离心套管的离心管置于离心机内6000～8000g离心20～30秒，去除上清；(5)再次将离心套管的离心管置入离心机内6000～8000g离心，吸去残液；(6)加入600～800微升70％冰乙醇，充分涡旋后，将离心套管的离心管置于离心机内6000～8000g离心20～30秒，去除上清；(7)再次将离心套管的离心管置入离心机内，6000～8000g离心，吸去残液；(8)置56℃金属浴上开盖烘干硅珠，加入洗脱液20～100微升，充分涡旋后，置56～60℃金属浴上孵化15～20分钟；(9)将硅珠悬浊液加入PCR扩增液内扩增。