[发明专利]一种B群流行性脑膜炎球菌重组蛋白疫苗及其制备方法

摘要

本发明提供了一种B群流行性脑膜炎球菌重组蛋白疫苗及其制备方法，属于生物制品领域。本发明的疫苗含有人H因子结合蛋白三个变异体重组蛋白。本发明还提供了B群流行性脑膜炎球菌重组蛋白疫苗的制备方法，包括人类H因子结合蛋白V1、V2、V3重组表达载体构建、表达菌株筛选鉴定、发酵培养、重组蛋白抗原的诱导表达、重组蛋白抗原的纯化以及蛋白检测，根据上述3种抗原成分的浓度，定量混合后结合铝佐剂制得。本发明提供的B群流行性脑膜脑炎球菌重组蛋白疫苗经腹腔注射免疫小鼠，可激发小鼠机体产生抗B群流行性脑膜炎特异抗体，能使补体介导的血清杀菌抗体升高8倍以上。

主权项

一种B群流行性脑膜炎球菌重组蛋白疫苗，其特征在于，含有人类H因子结合蛋白三个变异体的重组蛋白，分别为rHBP V1、rHBP V2、rHBP V3；其中，编码rHBP V1、rHBP V2、rHBP V3重组蛋白的核苷酸序列分别如SEQ ID NO.1‑3所示；其中，rHBP V1重组蛋白通过以下方法制备得到：合成rHBP V1基因片段，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，并在该基因的5′端和3′端分别添加Bgl II、Xho I酶切位点，与表达载体连接，导入宿主细胞，筛选得到高效表达rHBP V1的工程菌株MH‑rHBP V1，保藏编号为CGMCC NO.10718；将该工程菌株发酵培养，诱导表达重组蛋白，纯化、过滤除菌；rHBP V2重组蛋白通过以下方法制备得到：合成rHBP V2基因片段，核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，并在该基因的5′端和3′端分别添加Hind III、Xho I酶切位点，与表达载体连接，导入宿主细胞，筛选得到高效表达rHBP V2的工程菌株MH‑rHBP V2，保藏编号为CGMCC NO.10719；将该工程菌株发酵培养，诱导表达重组蛋白，纯化、过滤除菌；rHBP V3重组蛋白通过以下方法制备得到：合成rHBP V3基因片段，核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，并在该基因的5′端和3′端分别添加Nde I、Xho I酶切位点，与表达载体连接，导入宿主细胞，筛选得到高效表达rHBP V3的工程菌株MH‑rHBP V3，保藏编号为CGMCC NO.10720；将该工程菌株发酵培养，诱导表达重组蛋白，纯化、过滤除菌。