[发明专利]一种洋葱活性多肽提取物的制备方法及应用

摘要

本发明属于中药提取物的制备技术领域，具体公开了一种洋葱活性多肽提取物的制备方法及应用。本发明制备方法的具体步骤包括紫皮洋葱用酸溶醇沉法分离提取、冷冻干燥后获得洋葱蛋白冻干粉，依次加入酸性蛋白酶、胃蛋白酶酶解，离心取上清液，稀释后用凝胶层析分离，收集分子量3000‑1000 D的组分，冷冻干燥即得洋葱活性多肽冻干粉。本发明采用复合酶酶解和凝胶色谱方法制备洋葱活性多肽，具有条件温和、安全性高、成本低廉、产物易分离、绿色环保等优点；所制备的洋葱活性多肽具有明显的口服降糖、降脂作用，可以用于制备预防或治疗糖尿病、高血脂的药物或保健食品及食品。

主权项

一种洋葱活性多肽提取物的制备方法，步骤如下：（1）取洋葱，切丁、匀浆，加入洋葱重量1‑3倍的0.2 mol/L pH 5.0‑7.0的磷酸盐缓冲液浸泡，置于4℃冰箱12小时后，冷冻离心，上层即为洋葱蛋白粗提液；（2）向步骤（1）所得洋葱蛋白粗提液中缓慢加入其1/3‑1倍体积的95 v/v %乙醇，然后用0.6 w/w %NaOH溶液调节pH 至8.0，冰浴中静置过夜后，冷冻离心，收集沉淀，冷冻干燥即得洋葱蛋白冻干粉；（3）向步骤（2）所得洋葱蛋白冻干粉中加入6‑8倍重量的蒸馏水稀释，然后用0.1 mol/L HCl调节pH至3.5；（4）向步骤（3）所得溶液中按酶底比1:（8‑12）加入酸性蛋白酶，在55℃下酶解1‑3小时，灭酶，冷却至室温；步骤（4）中所述酶底比为酸性蛋白酶与步骤（2）所得洋葱蛋白冻干粉的质量比；所述酸性蛋白酶的活力为50000 u/g；（5）用0.1 mol/L HCl调节步骤（4）所得溶液pH至1.5，按酶底比1:（50‑70）加入胃蛋白酶，在37℃下酶解1‑3小时，灭酶，冷却至室温，4℃、20000转/分钟离心30 分钟，收集上清液；步骤（5）中所述酶底比为胃蛋白酶与步骤（2）所得洋葱蛋白冻干粉的质量比；所述胃蛋白酶的活力为3000 u/mg；（6）将步骤（5）收集的上清液用蒸馏水稀释至为含多肽3‑7 mg/mL的溶液，用葡聚糖凝胶层析分离，收集分子量1000‑3000 D的组分，冷冻干燥，即得到洋葱活性多肽提取物冻干粉。