[发明专利]一种稳定、高效的转化野生型克劳氏芽孢杆菌的方法

摘要

本发明涉及基因工程技术领域，提供了一种转化野生型克劳氏芽孢杆菌的方法。本发明采用接合转化的方法，向野生型克劳氏芽孢杆菌中有效转化入外源基因，进而实现大幅度提高克劳氏芽孢杆菌对外源蛋白表达量的目的。其中，重组菌克劳氏芽孢杆菌TDB-2摇瓶发酵上清液中碱性蛋白酶酶活高达2842U/mL，比宿主菌野生型克劳氏芽孢杆菌提高了18.3倍。且除了碱性蛋白酶外，采用本发明所述接合转化方法，申请人还成功地将外源的脂肪酶、淀粉酶、内切葡聚糖酶等多种基因转化入野生型克劳氏芽孢杆菌中，构建得到的重组菌株均能高效表达上述基因，转化效率高，效果稳定，取得了显著的技术效果，为克劳氏芽孢杆菌在酶制剂工业生产中的广泛应用奠定了基础。

主权项

一种转化野生型克劳氏芽孢杆菌的方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：（1）构建氯霉素抗性质粒；（2）将步骤（1）得到的氯霉素抗性质粒转化入一种氨基酸营养缺陷型枯草芽孢杆菌中，得到供体菌；（3）将步骤（2）得到的供体菌与不含该氨基酸营养缺陷的野生型克劳氏芽孢杆菌混合培养；（4）离心，洗涤混合菌体；（5）将混合菌体涂布于筛选培养基，该培养基中不含步骤（2）所述的氨基酸，同时含有氯霉素；（6）在一定条件下培养后，筛选培养基上长出的单菌落，即为转化入氯霉素抗性质粒的克劳氏芽孢杆菌重组菌株。