[发明专利]采用特异性引物鉴别汾远2号远志的方法有效
| 申请号： | 201510244426.6 | 申请日： | 2015-05-13 |
| 公开（公告）号： | CN104818337B | 公开（公告）日： | 2017-06-20 |
| 发明（设计）人： | 张福生;王丹丹;许晓双;秦雪梅;张丽增 | 申请（专利权）人： | 山西大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 山西五维专利事务所(有限公司)14105 | 代理人： | 张福增 |
| 地址： | 030006 山*** | 国省代码： | 山西;14 |
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| 摘要： | 本发明提供了一种采用特异性引物鉴别汾远2号远志的方法，是基于汾远2号远志的ITS序列，设计出8对可快速检测汾远2号远志的特异性引物，并在此基础上建立了PCR检测体系，可分别扩增出367bp或者463bp的PCR扩增产物，为汾远2号远志的药材鉴别提供了分子鉴定依据。根据该方法可构建检测试剂盒，具有操作简便、特异性好、灵敏度高、无需测序等优点，可实现对汾远2号远志的鉴别。 | ||
| 搜索关键词： | 采用 特异性 引物 鉴别 远志 方法 | ||
【主权项】：
一种采用特异性引物鉴别汾远2号远志的方法，其特征在于，由以下步骤完成：1)提取远志样品中的DNA；2)以步骤1)中提取的DNA为模板，使用特异性引物进行PCR扩增反应；3)用琼脂糖凝胶电泳分析PCR产物，有PCR扩增条带者即为汾远2号远志，无PCR扩增条带者则非汾远2号远志；所述的特异性引物是如下(1)至(8)引物对中的任意一对：(1)上游引物F1：5＇CGACCGTTGGACACGTATT 3＇下游引物R1：5＇TCGCCCCAAGAGATGTGA 3＇(2)上游引物F2：5＇CGACCGTTGGACACGTATT 3＇下游引物R2：5＇TCGCCCCAAGAGATCAGA 3＇(3)上游引物F3：5＇CGACCGTTGGACACGAATT 3＇下游引物R3：5＇TCGCCCCAAGAGATGTGA 3＇(4)上游引物F4：5＇CGACCGTTGGACACGAATT 3＇下游引物R4：5＇TCGCCCCAAGAGATCAGA 3＇(5)上游引物F5：5＇CGACCGTTGGACACGTATT 3＇下游引物R5：5＇ACCAAGTATCGCATTTCGC 3＇(6)上游引物F6：5＇CGACCGTTGGACACGAATT 3＇下游引物R6：5＇ACCAAGTATCGCATTTCGC 3＇(7)上游引物F7：5＇CGACCGTTGGACACGTATT 3＇下游引物R7：5＇TCGCCCCAAGAGATGAGA 3＇(8)上游引物F8：5＇CGACCGTTGGACACGAATT 3＇下游引物R8：5＇TCGCCCCAAGAGATGAGA 3＇所述PCR扩增反应体系为：所述第(1)至第(4)对引物对的PCR反应条件为：93℃5min；93℃30s，60℃30s，72℃30s，共35个循环；72℃5min，10℃10min；第(5)至第(8)对引物对的PCR反应条件为：93℃5min；93℃30s，65℃30s，72℃30s，共30个循环；72℃5min，10℃10min。
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