[发明专利]一种具有稳定还原能力胡敏酸的还原能力测定方法

摘要

一种具有稳定还原能力胡敏酸的还原能力测定方法，其步骤为1)提取有机废弃物中粗胡敏酸组分；2)胞外呼吸菌接种与扩繁培养；3)菌悬液离心；4)菌体重悬；5)粗胡敏酸组分的纯化；6)具有稳定还原能力胡敏酸组分的提取与纯化；7)胡敏酸稳定还原能力的测定。本发明操作便捷、所提出胡敏酸纯度高，对有机废弃物资源化利用具有重要意义。

主权项

一种具有稳定还原能力胡敏酸的还原能力测定方法，其步骤为：1)提取有机废弃物中粗胡敏酸组分：将NaOH和Na4P2O7混合液加入有机废弃物中，室温下避光震荡，离心后取上清液，用HCl将上清液酸化至pH＝2，静置，离心弃上清液，用超纯水冲洗胡敏酸沉淀，直至洗出液无Cl‑检出，用磷酸氢二钠缓冲液将胡敏酸沉淀溶解；2)胞外呼吸菌接种与扩繁培养：在超净工作台下接种胞外呼吸细菌至LB液体培养基中，接种后避光摇床培养；3)菌悬液离心：将培养好的菌悬液离心弃去上清液，保留菌体沉淀；4)菌体重悬：往菌体沉淀中加入无机培养液，在漩涡振荡器中将菌体重悬，得菌悬液；5)粗胡敏酸组分的纯化：将菌悬液加入步骤1)提取出的粗胡敏酸溶液中，同时加入柠檬酸铁和乳酸钠溶液，随后向混合液中充氮气将瓶盖密封，避光摇床震荡培养得反应液；6)具有稳定还原能力胡敏酸组分的提取与纯化：将反应液过滤膜，收集滤液，用HCl调反应液的pH＝2，静置后离心，弃上清液，用超纯水冲洗胡敏酸沉淀至洗液无Cl‑检出后，用磷酸二氢钠缓冲液溶解胡敏酸沉淀，得胡敏酸溶液；7)胡敏酸稳定还原能力的测定：往步骤6)所得胡敏酸溶液加入步骤4)中的菌悬液，同时加入柠檬酸铁和乳酸钠溶液，随后往混合液中充氮气将瓶盖密封，避光摇床震荡培养，得反应混合液，取部分反应混合液采用邻菲啰啉法测定混合液中Fe2+的含量，根据加入的Fe3+量与反应后生成的Fe2+量计算具有稳定还原能力胡敏酸的还原能力；其中，步骤7)之后进行胡敏酸稳定还原能力的验证：将步骤7)中所得的反应混合液剩余部分过滤膜，重复步骤6)和7)，再测定胡敏酸的还原能力，并重复数次，若数次测定值相差小于10％，即证明所测的为胡敏酸的稳定还原能力。