[发明专利]一种中缅树鼩组织DNA的提取方法

摘要

本发明提供了一种中缅树鼩组织DNA的提取方法，包括以下步骤a)将中缅树鼩组织在匀浆液中离；b)将步骤a)获得的上清液离心；c)将步骤c)获得的沉淀在匀浆液中离心；d)将步骤c)获得的沉淀与第一溶液混合均匀，再与第二溶液混合后冰溶；e)将步骤d)获得的溶液以第三溶液混合，冰溶；f)将步骤e)获得的溶液离心；g)将步骤f)获得的上清液在混合溶液中抽提，重复一次；h)将步骤g)获得的上清液与无水乙醇混合，放置过夜；i)将步骤h)获得的溶液离心，用乙醇洗涤干燥。本发明通过限定提取过程中试剂种类、试剂用量以及提取条件，提取得到的DNA纯度较高，电泳条带无拖尾现象，且成本较低。

主权项

一种中缅树鼩组织DNA的提取方法，包括以下步骤：a)将中缅树鼩组织在匀浆液中在3～5℃、1200r/min～1800r/min条件下离心8min～12min，所述中缅树鼩组织与匀浆液的质量体积比为0.15～0.25g：0.5～1.5mL；b)将步骤a)获得的上清液在3～5℃、1200r/min～1800r/min条件下离心18min～22min；c)将步骤c)获得的沉淀在匀浆液中在3～5℃、1200r/min～1800r/min条件下离心8min～12min，所述匀浆液与中缅树鼩组织的体积质量比为1.5～2.5mL：0.15～0.25g；d)将步骤c)获得的沉淀与第一溶液混合均匀，再与第二溶液混合后冰溶8min～12min；所述第一溶液包括Tris‑HCl、Na2EDTA和NaCl；所述第二溶液包括NaOH和十二烷基硫酸钠；所述第一溶液、第二溶液和中缅树鼩组织的体积质量比为40～60μL：90～110μL：0.15～0.25g；e)将步骤d)获得的溶液与第三溶液混合，冰溶50min～70min；所述第三溶液包括钾离子和醋酸离子；所述第三溶液与第二溶液的体积比为70～80:90～110；f)将步骤e)获得的溶液在11000r/min～13000r/min条件下离心8min～12min；g)将步骤f)获得的上清液在混合溶液中在11000r/min～13000r/min条件下抽提2～3min，重复一次；所述混合溶液包括酚、氯仿和异戊醇；所述上清液与所述混合溶液的体积比为0.8～1.2:0.8～1.2；h)将步骤g)获得的上清液与3℃～5℃的无水乙醇混合，在‑35℃～‑45℃放置过夜；i)将步骤h)获得的溶液在3℃～5℃、11000r/min～13000r/min下离心15min～30min，用3℃～5℃乙醇洗涤干燥；其中，所述第二溶液包括：1wt％的十二烷基硫酸钠和0.2mmol/L NaOH。