[发明专利]一种雄甾-1,4-二烯-3,17-二酮的制备方法

摘要

本发明公开了一种雄甾‑1,4‑二烯‑3,17‑二酮的制备方法，其包括如下步骤：(1)向发酵培养基中接种分枝杆菌，发酵获得发酵液；(2)向发酵液中加入乙醇，破碎处理后，固液分离取上清液，将上清液过强碱阴离子交换树脂的色谱柱，收集流出液，得到流出液I；(3)将流出液I上样至骨架为苯乙烯‑二乙烯苯的大孔吸附树脂，使用甲醇溶液洗脱，得洗脱液II，浓缩结晶，再以有机溶剂溶解后重结晶，即得雄甾‑1,4‑二烯‑3,17‑二酮纯品，所述的有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸丁脂和丙酮中的任一种。所述的方法全面改进了ADD的发酵提取工艺使发酵产物损失少，使用的有机溶剂较少，更加环保。

主权项

一种雄甾‑1,4‑二烯‑3,17‑二酮的制备方法，其特征在于，其包括如下步骤：(1)向发酵培养基中接种分枝杆菌(Mycobacterium sp.)，发酵获得发酵液，所述的发酵培养基包括如下的组成成分：20～40g/L植物甾醇、0.5～3g/L有机酸、0.5～3g/L无机氮源、5～20g/L有机碳源、35～50g/L有机氮源、1～3g/L无机盐A、0.1～0.5g/L无机盐B、0.002～0.006g/L微量元素和2～4g/L助溶剂，所述的有机酸选自乙酸、丙酸、酒石酸和柠檬酸中的一种或多种，所述的无机氮源选自硫酸铵、硝酸铵、氯化铵和硝酸钠中的一种或多种，所述的有机碳源选自葡萄糖、麦芽糖、果糖、甘油和甘露醇中的一种或多种，所述的有机氮源选自黄豆粉、花生粉、羽毛粉和棉籽粉中的一种或多种，所述的无机盐A选自磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、磷酸二氢钠和磷酸氢二钠中的一种或多种，所述的无机盐B选自硫酸镁、硫酸钠和硫酸钾中的一种或多种，所述的微量元素选自硫酸亚铁、硫酸锌、氯化锰中的一种或多种，所述的助溶剂选自吐温20、吐温80、乙醇和卵磷脂中的一种或多种；(2)向步骤(1)获得的发酵液中加入乙醇，破碎处理后，固液分离取上清液，将上清液过强碱阴离子交换树脂的色谱柱，收集流出液，得到流出液I；(3)将步骤(2)所得的流出液I上样至骨架为苯乙烯‑二乙烯苯的大孔吸附树脂，使用甲醇溶液洗脱，得洗脱液II，将所述洗脱液II浓缩结晶，再以有机溶剂溶解后重结晶，即得雄甾‑1,4‑二烯‑3,17‑二酮纯品，所述的有机溶剂选自乙酸乙酯、乙酸丁脂和丙酮中的任一种。