[发明专利]一种琼脂糖酶的固定化方法

摘要

本发明所属酶工程研究开发技术领域。本发明涉及一种琼脂糖酶的固定化方法研究。用1.5-2％(V/V)乙酸配制1：20(W/V)的壳聚糖溶液，充分溶解；溶解后的壳聚糖溶液逐滴滴入1mol/L氢氧化钠溶液中，过滤收集壳聚糖珠；用蒸馏水洗涤至中性，再用0.2mo1/L、pH7.6的磷酸缓冲溶液浸泡过夜；取浸泡的壳聚糖珠载体2.5-5g，加入2.5％的戊二醛20-25ml，水浴振荡0.5小时，室温交联5-6小时，磷酸缓冲液冲洗壳聚糖珠交联载体；在壳聚糖珠交联载体中加入10-15mL稀释的琼脂糖酶液，搅拌均匀，4℃固定2-3小时，用磷酸缓冲液冲洗；抽真空得到固定化琼脂糖酶。本发明制备固定化酶的方法，载体廉价易得，工艺简单，条件温和，对酶活性损失小，酶活回收率可达到77.6％。

主权项

琼脂糖酶固定化的方法，其特征在于用壳聚糖微球固定化琼脂糖酶。包括以下过程：步骤(一)：用1.5‑2％(V/V)乙酸配制1∶20(W/V)的壳聚糖溶液，充分溶解；步骤(二)：将步骤(一)的壳聚糖溶液逐滴滴入1mol/L氢氧化钠溶液中，壳聚糖将凝聚成白色颗粒，过滤收集壳聚糖珠；步骤(三)：将步骤(二)的壳聚糖珠用蒸馏水洗涤至中性；步骤(四)：将步骤(三)的壳聚糖珠用0.2mol/L、pH7.6的磷酸缓冲溶液浸泡过夜；步骤(五)：取步骤(四)中的壳聚糖珠载体2.5‑5g，加入2.5％的戊二醛20‑25ml，水浴振荡0.5小时，室温交联5‑6小时，磷酸缓冲液冲洗壳聚糖珠交联载体；步骤(六)：在步骤(五)中的壳聚糖珠交联载体中加入10‑15mL稀释的琼脂糖酶液，搅拌均匀，4℃固定2‑3小时，用磷酸缓冲液冲洗；步骤(七)：将步骤(六)中的固定化酶抽真空得到固定化琼脂糖酶。