[发明专利]黔东南小香鸡隐性白羽新品系的培育方法及应用

摘要

本发明公开了一种黔东南小香鸡隐性白羽新品系的培育方法及应用，该方法按以下步骤进行（1）用从黔东南小香鸡分离出的白羽鸡自交繁殖F1代；（2）根据分子标记辅助选择，从F1代中筛选出ii的隐性纯合等位基因型的个体；（3）用三黄鸡纯系或其他有色羽鸡纯系与F1进行测交，剔除F1中分离出的显性白羽个体和有色羽个体，结合步骤（2）的检测结果选育出隐性纯合的个体公母鸡，然后自繁生产B；（4）按照步骤（3）的方法，对步骤（3）中的W进行反复测交、选育，不断剔除分离出显性白羽个体和有色羽个体；将留选的隐性白羽个体进行自繁扩群，组建家系，培育出隐性白羽新品系。

主权项

一种黔东南小香鸡隐性白羽新品系的培育方法，其特征在于包括以下步骤：(1)用从黔东南小香鸡分离出的白羽鸡自交繁殖产生F1代；(2)从F1代中筛选出鸡PMELl7基因ii的隐性纯合等位基因型的个体：①样品采集采集黔东南小香鸡白羽鸡的血液，并加EDTA－Na2抗凝，－20℃保存备用；②基因组DNA提取与引物设计利用TIANamp Blood DNA Kit试剂盒提取目的DNA，根据NCBI公布的鸡PMEL17基因的第10外显子序列，采用Primer5.0软件自行设计引物，目的片段扩增长度528bp；所述PMEL17基因的登录号为:GenBank Accession No.AY636129；F 5'GCACAGCGCAGATGCAGAC 3'R 5'CAGCAGCAAACGCAGGGTAG 3'③25μLPCR反应体系为DNA模板1μL，上下游引物各2μL，2xTaq PCR MasterMix试剂12.5μL，加ddH2O 7.5μL；PCR反应参数：30次循环；94℃预变性5min；94℃变性30s，57℃退火45s，72℃延伸90s；最后72℃延伸10min，4℃保存；其中，2xTaq PCR MasterMix购自天根生化科技有限公司；④PCR扩增产物的检测及结果判定取10μL PCR扩增产物，用1％琼脂糖凝胶电泳检测，电泳电压为120V，电泳时间为30min，凝胶成像系统检测是否为目的条带，再切胶回收PCR扩增产物，进行直接测序检测黔东南小香鸡白羽鸡PMEL17基因多态性；结果显示样本的PMELl7基因序列第10外显子49位点起有9‑bp缺失变异，即：‑CTGGGCACC‑，均为ii基因型，且对应三个氨基酸的缺失，即色氨酸，丙氨酸和脯氨酸；⑤待检个体的选择与淘汰根据检测结果，培育纯合隐性白羽鸡群体的选留ii基因型，将所有纯合隐性白羽个体留种进行扩繁，将形成一个纯合群体，用于育种；(3)用三黄鸡纯系或其他有色羽鸡纯系与F1进行测交，剔除F1中分离出的显性白羽个体和有色羽个体，结合步骤(2)的检测结果选育出隐性纯合的个体公母鸡，然后自繁生产W；(4)按照步骤(3)的方法，对步骤(3)中的W进行反复测交、选育，不断剔除分离出显性白羽个体和有色羽个体；将留选的隐性白羽个体进行自繁扩群，组建家系，培育出隐性白羽新品系。