[发明专利]有效控制西瓜不定芽水渍化现象发生的高频再生体系建立方法

摘要

本发明为西瓜品种‘Crimson Sweet’和‘黑孩儿’高效再生体系的建立方法，属于植物生物技术领域。有效控制西瓜不定芽水渍化现象发生的高频再生体系建立方法，该方法步骤为以2个品种5 d苗龄成熟胚子叶和下胚轴为材料，在不定芽诱导培养基中获得不定芽，不定芽在芽伸长培养基上培养2‑3周后转移至生根培养基，最终获得再生植株。通过调控不定芽诱导、芽伸长和生根培养基中不同激素的浓度，建立了2个品种的高频再生体系，再生率最高分别为83.3%和79.17%，同时每个子叶基端部分外植体诱导不定芽数可达为3‑7个。并且以‘Crimson Sweet’材料的再生体系进行了农杆菌介导遗传转化，获得了抗西瓜枯萎病效应蛋白FonSix6的转基因植株。

主权项

有效控制西瓜不定芽水渍化现象发生的高频再生体系建立方法，该方法包括以下步骤：1） 将西瓜材料‘黑孩儿’种子小心去壳，用70% 的酒精消毒1 min，无菌去离子水冲洗2 次，0.1% 的升汞溶液中缓慢震荡10 min，无菌去离子水冲洗3‑5 次，无菌滤纸吸干后移至1/2MS 培养基黑暗条件下培养；2） 取经步骤1）在1/2MS 培养基上暗培养5天的‘黑孩儿’的无菌苗子叶和其对应的下胚轴，子叶横切为二，然后基端部分一切为二，同样顶端部分也一切为二，表面朝上接种于添加6‑ 苄氨基腺嘌呤的MSH 芽诱导培养基，30 天后不定芽增殖形成大量的丛生芽；所述MSH芽诱导培养基指，以MS 培养基配方为基础，其维生素含量替换为SH 培养基中的维生素含量，且6‑苄氨基腺嘌呤在所述MSH 芽诱导培养基中的浓度为2mg/L；3） 将步骤2）获得的子叶基端部分形成的丛生芽切割成单芽接种至伸长培养基中培养2 周；所述伸长培养基指MSH培养基中添加1 mg/L GA3，1 mg/L IAA，2 mg/L GA3，琼脂7 mg/L，蔗糖3%4）将长至2‑3 cm 的小苗接种至生根培养基中，所述生根培养基为1/2MS 中添加0.2 mg/L NAA 或者0.5 mg/L IAA，琼脂7 mg/L，蔗糖2%；5）将生根的再生苗在组培室开盖炼苗2天，然后再在温室中炼苗1‑2天，移入由蛭石、珍珠岩和营养土组成的基质中在温室培养。