[发明专利]一种黄酮醇3-O-半乳糖基转移酶CsUGT78A15基因及其编码蛋白和应用

摘要

本发明公开了一种黄酮醇3‑O‑半乳糖基转移酶CsUGT78A15基因，该基因从茶叶鲜叶中分离获得，具有如SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，该基因的编码蛋白具有如SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列；本发明首次克隆并验证了形成茶饮料柔和涩味相关的黄酮醇3‑O‑半乳糖基转移酶基因CsUGT78A15功能，本发明还提供了含有CsUGT78A15基因的重组质粒、转基因工程菌和重组蛋白，为开发具有改善茶叶滋味的酶类或工程微生物，深化茶饮料加工，开发不同滋味茶饮品，奠定了坚实基础。

主权项

1.一种黄酮醇3‑O‑半乳糖基转移酶CsUGT78A15基因，其特征在于，该基因的获得方法，包括以下步骤：(1)设计带有表达载体pMal‑c2X载体的多克隆酶切位点的特异引物，其引物序列如SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4所示：SEQ ID NO：3：正向引物：5’‑TCTAGAATGTCGACGATGGTGACTAACTCCTC‑3SEQ ID NO：4：反向引物：5’‑CTGCAGTCAAAGATTGAGACTTGTTACCACC‑3’；(2)按照TaKaRa RNAiso试剂盒和RNAiso Plus试剂盒说明书，提取茶树品种农抗早鲜叶RNA，并反转录为cDNA；(3)以反转录产物cDNA为模板，用SEQ ID NO：3和SEQ ID NO：4引物进行扩增，扩增程序为94℃预变性30s，94℃变性10s，72℃退火20s，72℃延伸45s，30个循环，72℃继续延伸10min，获得的PCR产物，即为所述CsUGT78A15基因。