[发明专利]一种检测污染水体遗传毒性的生物学方法

摘要

本发明涉及环境保护领域的水质监测方法，具体涉及一种用DNA氧化损伤产物‑8‑羟基脱氧鸟苷(8‑OHdG)为标志物定量评价污染水体遗传毒性效应的测试方法。该方法基于DNA氧化损伤是外源性污染物导致生物体遗传毒性的最常见生物学机制，以8‑羟基脱氧鸟苷(8‑OHdG)为标志物，检测污染水体对鱼类体内的DNA氧化损伤程度，并以4‑硝基喹啉‑1‑氧化物(4‑NQO)或苯并[a]芘为阳性参照物，定量评价污染水体的遗传毒性效应。该方法可综合评价污染水体对生物的遗传毒性效应，具有操作简单、实验周期短、反应灵敏、重现性好等优点，非常适用于各种类型污染水体的遗传毒性定量评价，将在水质监测工作中有广阔应用前景。

主权项

一种检测污染水体遗传毒性的生物学方法，其特征在于步骤如下：第一步、驯养试验：将实验用鱼放置在经24小时曝气除氯且经活性碳吸附处理的自来水或标准配制稀释水中进行驯养7‑10天；第二步、暴露试验：在装有待测水样的玻璃烧杯中放置一定数量的实验用鱼进行暴露实验，暴露时间为7‑14天；第三步、8‑OHdG检测：取全鱼或部分器官组织放置烧杯中，然后用匀浆机进行充分匀浆；匀浆液转入离心管，在5000‑1000rpm条件下离心5‑10分钟后取上清液，用酶联免疫(ELISA)试剂盒或色谱法检测上清液中的8‑OHdG浓度，计算实验用鱼体内8‑OHdG浓度；第四步、标准曲线制作：以4‑硝基喹啉‑1‑氧化物(4‑NQO)或苯并[a]芘为阳性参照物，制备含有不同浓度阳性参照物的标准稀释溶解暴露处理实验用鱼，以不含阳性参照物的人工配制稀释水为空白对照组；采用酶联免疫(ELISA)试剂盒检测实验用鱼体内8‑OHdG浓度；以阳性参照物暴露处理组/空白对照组的8‑OHdG浓度比值为纵坐标，以阳性参照物暴露浓度为横坐标，制作标准曲线；第五步、毒性评价：计算受试水样暴露处理组与空白对照组的8‑OHdG浓度比值，不含阳性参照物的人工配制稀释水，然后用标准曲线方程计算受试水样遗传毒性的4‑NQO或苯并[a]芘当量值；受试水样的遗传毒性效应以4‑NQO或苯并[a]芘当量值进行定量评价。