[发明专利]树鼩骨髓间充质干细胞培养系统

摘要

本发明涉及一种树鼩骨髓间充质干细胞培养系统，通过使用成分明确的培养系统，并且提供特定的营养成分，和添加相关的小分子化合物等，维持细胞的多向分化潜能，可以在体外获取和培养高纯度的树鼩骨髓间充质干细胞，满足体内体外细胞实验的要求，让骨髓间充质干细胞具有多向分化潜能，低免疫原性，取材方便，扩增迅速，遗传背景稳定等特点，因此在组织工程和细胞及基因治疗等方面具有广阔的应用前景。该树鼩骨髓间充质干细胞完全培养液的使用，为基础研究带来便捷，为临床应用带来前景。

主权项

1.一种树鼩骨髓间充质干细胞培养方法，其特征在于先使用常规贴壁分离筛选法、密度梯度离心法、流式细胞仪分选法和免疫磁珠分离法分离细胞后，再直接使用树鼩骨髓间充质干细胞培养液培养原代细胞；然后在后续传代过程中，使用树鼩骨髓间充质干细胞完全培养液进行培养，在细胞汇合度达到90%以前，完全培养液每隔一天换液；超过90%以上，进行细胞传代；所述树鼩骨髓间充质干细胞培养液的基础成分包括：100U/mL青霉素+100μg/mL链霉素+低糖DMDM培养基；所述完全培养液的成分包括：10%‑15%血清替代物KSR +10mM非必需氨基酸NEAA +10mM beta巯基乙醇+5‑8ng/mL bFGF+15‑20ng/mL EGF+3‑6μM CHIR99021；对获得的细胞进行周期检测，特征分子表达量检测，细胞成骨，成脂和成软骨的分化和鉴定；最终肯定培养所得的树鼩骨髓间充质干细胞可长期传代，并仍然维持较高纯度的间充质干细胞，具有较好的多向分化潜能。