[发明专利]一种提高牛樟芝产量及其生物活性物质含量的方法

摘要

本发明公开了一种提高牛樟芝产量及其生物活性物质含量的方法，将五叶松的根、茎、叶以不同的比例混合，经过超声波破碎处理，超临界流体萃取提取五叶松脂，得到不同pH的五叶松提取液，然后在牛樟芝生长过程中，采用谷类培养基，并且通过添加相应pH的五叶松提取液来控制牛樟芝菌生长环境pH值为5‑7之间，同时控制二氧化碳浓度为1~5%，氧气浓度为5~15%，本发明方法可以加速牛樟芝生长速率，同时提高其生物活性物质，如三萜类、多醣体和腺苷的含量。

主权项

一种提高牛樟芝产量及其生物活性物质含量的方法，其特征在于：其包括以下步骤： 1）制备五叶松提取液：将五叶松的根、茎、叶粉碎至粒径35~60μm，混合均匀后溶解于浓度20%的酒精中进行超声波破碎处理，破坏其细胞壁，使得五叶松脂溶出，所述超声波破碎条件为温度25‑30℃，时间20‑25min；超声波破碎后再经过超临界流体萃取，提取五叶松脂，所述超临界流体萃取具体为：以液态二氧化碳为溶剂，在压力4000‑5000psi下萃取30‑35min，得到不同pH的五叶松提取液；其中，根：茎：叶的比例为93‑95：4‑6：1时，得到pH=5.5的五叶松提取液；根：茎：叶的比例为45‑50：35‑40：15时，得到pH=6.0的五叶松提取液；根：茎：叶的比例为38‑40：30‑32：30时，得到pH=6.5的五叶松提取液；2）牛樟芝菌繁殖及活化切取外围完整厚实的牛樟芝菌丝做为菌种，接入液体培养基中，于25‑30℃下培养13‑15天，形成牛樟芝菌丝球，完成菌丝活化；所述培养过程，控制二氧化碳浓度为1~5%，氧气浓度为5~15%；3) 初发酵将步骤2）形成的牛樟芝菌丝球移至pH=5.5的谷类培养基进行初发酵，并接上pH值自动感应器，当环境pH值低于5时，自动添加pH=6.0的五叶松提取液，待牛樟芝子实体直径大于10cm时，自动添加pH=6.5的五叶松提取液；同时，所述初发酵过程，采用震荡发酵，震荡速度为150‑200r/min，温度28‑30℃，同时控制二氧化碳浓度为1~5%，氧气浓度为5~15%，发酵3‑5天；其中，所述谷类培养基的制备方法如下：将谷类高温灭菌后与马铃薯葡萄糖琼脂培养基混合均匀，放置冷却成型，即为谷类培养基；4) 后发酵初发酵3‑5天后，将牛樟芝菌移植到新的谷类培养基进行后发酵，所述后发酵过程，当环境pH值低于5时，自动添加pH=5.5的五叶松提取液，同时，控制二氧化碳浓度为1~5%，氧气浓度为5~15%，发酵40天以上。