[发明专利]一种鹿茸骨膜组织的转基因方法

摘要

本发明公开了一种鹿茸骨膜组织的转基因方法，属于基因工程技术领域。本发明所提供的方法是利用脂质体包裹携带标记基因的病毒质粒，再将包裹后的病毒质粒转染到包装细胞中生成病毒颗粒，收集含病毒颗粒的细胞培养液上清液，浓缩后保存备用，采集鹿茸的骨膜组织，切割后利用包装好的病毒颗粒进行感染，最后将经过病毒感染的鹿茸骨膜组织移植到动物体内，鹿茸萌发后获得转基因鹿茸组织。

主权项

一种鹿茸骨膜组织的转基因方法，其特征在于，具体步骤如下：1)利用脂质体Lipofectamine 2000包裹携带有外源基因的病毒质粒Pll3.7、衣壳质粒pMDG、包装质粒pMDLg/pRRE，pRSV_rev，再将上述包裹好的病毒质粒与包装细胞293t在37℃，5％CO2的条件下孵育5h， 孵育使用的培养基是含有10％FBS的DMEM，孵育结束后更换含有10％FBS、1％谷氨酰胺、双抗100U/ml的DMEM完全培养基，孵育结束后获得转染细胞液；2)转染24h后收取步骤1)所得的转染细胞液，离心去除破碎细胞，再使用0.45μm滤器过滤上清液，在利用离心超滤管，在4℃、5000g的条件下离心30min获得病毒液，保存备用；3)采集鹿生茸区骨膜组织，并将骨膜组织切割成0.2mm厚的薄片，置于每孔含有200‑400μLDMEM的6孔培养板中，培养基含有10％FBS和100U/mL双抗；4)吸干步骤2)所得的病毒液中培养基后，将病毒与助染剂Polybrene及DMEM培养基混合，使得最终每1mLDMEM培养基中含有10％FBS，100U双抗，10μg助染剂Polybrene，病毒的滴度为3.32×107TU/mL，再在每个培养孔中加入2mL病毒感染液，每隔3天更换病毒感染液1次，连续感染3周，获得感染组织；5)将步骤4)所得的感染组织移植到动物体内，鹿茸萌发后获得转基因鹿茸组织。